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[标本处理] 小鼠外周血分析NK细胞

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发表于 2019-12-29 21:22:35 | 显示全部楼层 |阅读模式
25流星
最近用流式分析小鼠外周血血中NK细胞含量,不知道为什么淋巴细胞特别少而碎片特别多,做了几次都是这样,有人能帮忙解答吗?我的操作是这样:100uL全血,染抗体30min,加2mL 氯化铵裂解液室温15min, 1500rpm离心5min,2mL 1%FBS的PBS 500g,5min洗一次后,300uL重悬上机,

图片1.jpg
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2019-12-30 09:34:47 | 显示全部楼层
本帖最后由 liuruiluna 于 2019-12-30 09:37 编辑

感觉是一气裂解15分钟时间过长。裂解时间缩短到10分钟,加入PBS终止裂解,离心。试试。如果离心后看到残留红细胞多,再加1ml裂解液,裂解个两三分钟,加PBS终止裂解,离心。
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发表于 2019-12-30 10:52:59 | 显示全部楼层
裂解没问题,细胞都挺好,主要是碎片区信号太多了。把FSC获取的阈值设置到100万左右位置,就能使你的白细胞获取数量大增,淋巴细胞和单核区域的比例就会很高了。
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 楼主| 发表于 2019-12-30 13:28:16 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-12-30 10:52
裂解没问题,细胞都挺好,主要是碎片区信号太多了。把FSC获取的阈值设置到100万左右位置,就能使你的白细胞 ...

好的,谢谢倪老师,下次我试试看
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发表于 2023-1-17 10:02:14 | 显示全部楼层
请问老师 您的裂红液是自己配置的 还是买的商品化的裂红液啊
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发表于 2023-1-18 07:31:04 | 显示全部楼层
流123456 发表于 2023-1-17 10:02
请问老师 您的裂红液是自己配置的 还是买的商品化的裂红液啊

一般问题不大的,自己配制也简单,ACK裂解液比较常用,一般配制1升的ACK裂解液,只需三个试剂:
成份用量终浓度
氯化铵 (mw: 53.49 g/mol)8.02 g0.15 M
碳酸氢钾 (mw: 100.12 g/mol)1 g0.01 M
EDTA二钠(mw: 372.24 g/mol)0.0372 g0.0001 M


加水至1升。配制出的ACK裂解液可直接用,室温可保存6个月。
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