细胞内钙离子检测经验分享

吴玉霜

本实验室的学生之前做了几次钙离子检测均未做出结果，此次终于用BD LSRFortessa流式仪检测出钙离子动态变化趋势。弄懂了横坐标Time的数字，表示的是多长时间。。

上机方案过程建立如下：先用检测样本管上机，AquireData20s,然后暂停获取样本，快速将刺激剂加入样本管中，混匀后将该管上机（该过程越快越好，因为钙离子变化很快），Append继续收集5分钟（300s）。起初用该方法检测一直没有趋势，怀疑过是不是机器没有调试好检测不出来，这次换了一种刺激剂终于做出来了。说明方案没问题，是之前刺激不够。

葡萄糖刺激，未有变化

氯化钾刺激，有趋势

根据设定的时间，未刺激20s和刺激后上机300s共计320s。如图，横坐标32，000的位置相当于320s。之前因为没有变化趋势，且因为是叠加收集没有分割线，无法弄清楚收样20s对应的横坐标位置。此次有明显的趋势变化，20s对应横坐标2*1，000的位置，即表示每个间隔表示0.01s。

根据本次结果，刺激后变化不明显，下次可改进一下收集时间。未刺激样本收集时间可适当延长，缩短刺激后收集时间。

欢迎大家补充讨论~

Veblen

除了您提到的KCL, ionomycin刺激引起钙硫的效果也不错。

吴玉霜

非常感谢倪老师对我们的支持！

吴玉霜

Veblen 发表于 2019-12-30 19:02
除了您提到的KCL, ionomycin刺激引起钙硫的效果也不错。

感谢站友的分享

hwthwt

感谢楼主无私的分享

a86856635

曾经用流式做钙流，奋斗了好久没有预期的结果。最后直接细胞培养孔板里面，在孔板里面染色，用荧光显微镜进行观测的。效果不错，最后文章也接收了。

niwanmao

a86856635 发表于 2020-1-4 21:05
曾经用流式做钙流，奋斗了好久没有预期的结果。最后直接细胞培养孔板里面，在孔板里面染色，用荧光显微镜进 ...

荧光显微镜肉眼能看出差异，流式更加能检测出差异才对啊。是仪器的问题？

a86856635

niwanmao 发表于 2020-1-5 10:15
荧光显微镜肉眼能看出差异，流式更加能检测出差异才对啊。是仪器的问题？ ...

仪器上样时的振动刺激，温度变化的刺激，从上样到检测到信号的延迟等。总是不如人意。有些仪器可能确实不适合做钙流检测吧。

xzmczff

niwanmao 发表于 2020-1-5 10:15
荧光显微镜肉眼能看出差异，流式更加能检测出差异才对啊。是仪器的问题？ ...

倪老师，请问一下，做细胞内钙流的检测，BD calibur可以做吗？https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8158-1-1.html
这个帖子里用的是BD LSRFortessa。另外钙流检测可以采用直方图进行收集统计吗？谢谢

niwanmao

xzmczff 发表于 2021-12-9 08:58
倪老师，请问一下，做细胞内钙流的检测，BD calibur可以做吗？https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8158- ...

Calibur可以做的，同样也是要基于Time参数。
不能用直方图，直方图看不出随时间变化的钙离子染料强度变化。