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如何把人外周血NK细胞分群做到极致?

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发表于 2020-3-23 18:30:29 | 显示全部楼层 |阅读模式

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NK细胞是固有淋巴细胞(ILC)家族的具有细胞毒功能的一员, 它们能够通过激活和抑制受体传递的信号之间的微妙平衡,识别并杀死转化细胞,包括肿瘤或病毒感染的细胞,并分泌各种可溶性因子。
NK细胞在40年前被认为大型颗粒状淋巴细胞,能够杀死目标细胞而无需事先致敏,且能避免杀伤健康的自体细胞。仅仅几年后,才发现了HLA I类特异性抑制受体(代表主要的NK细胞免疫检查点)和一系列活化的NK受体(天然细胞毒性受体(NCR:NKp46、NKp30和NKp44)、NKG2D和DNAM-1以及共受体NTB-A、2B4、NKp80和CD59),从而阐明了它们的功能机制。特别是,NK细胞可以通过所谓的抑制性杀伤性Ig样受体(KIR)、白细胞免疫球蛋白样受体、subfamily B member 1 (LILRB1)和/或CD94-NKG2A异二聚体来识别自体正常细胞上的人白细胞抗原(HLA-1)分子,这些相互作用能产生负性调节信号,从而防止杀死自体健康细胞。在下调/失去HLA-1分子的表面表达的靶细胞的情况下,如在肿瘤转化或病毒感染期间发生的那样,HLA-1特异性NK抑制受体不能进一步识别其配体,便能随后通过激活受体活化NK细胞。因此,已经失去I类HLA表达的肿瘤细胞,虽然能避免CD8 T淋巴细胞攻击,但逃不过NK细胞的追杀。
通常,人NK细胞约占外周血(PB)淋巴细胞总数的10%,存在不同的NK亚群,不同的亚群在溶细胞活性、细胞因子产生和归巢能力方面显示出明显的功能差异。
平时,我们大多数人只把NK分为CD56dimCD16+和CD56 brightCD16-两类,但实际上,NK的功能亚群,并不仅仅这两群,目前的文献综合起来,可分为8个功能亚群(实际上其中Terminally Differentiation和Memory-like两个亚群是Mature下细分的两个),这8个亚群的粘附分子、趋化因子和细胞因子受体、死亡受体、活化受体、抑制受体等表达如下表:
20200323_150733.jpg 20200323_150744.jpg

这张表,太多的标记了,眼花缭乱,没关系,下面直接来挑几个重要的标记,看看如何设门分析上面8个亚群。下图中的CD56 brightCD16neg/dim就是Immature,Donor1是巨细胞病毒阴性(即作为正常参照),Donor2是CMV病毒阳性的患者,明显可以看出在NK亚群组成上两者之间的不同:
20200323_150853.jpg

把NK做到极致有什么好处?当然有用,可以从各个亚群的功能上面,深入了解疾病致病机理,很多时候,这是做总NK看不出来的。
参考文献:Del Zotto G, Antonini F, Pesce S, Moretta F, Moretta L, Marcenaro E. Comprehensive Phenotyping of Human PB NK Cells by Flow Cytometry [published online ahead of print, 2020 Mar 21]. Cytometry A. 2020;10.1002/cyto.a.24001. doi:10.1002/cyto.a.24001
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发表于 2020-3-26 10:26:28 | 显示全部楼层
分的这么详细,不知道有没有做过骨髓细胞内的NK分类
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发表于 2020-4-11 00:09:29 | 显示全部楼层
本帖最后由 laogong 于 2020-4-11 00:14 编辑

倪老师,请问一下,我现在有一组数据,做的NK分型,下面的分析不知道对不对。因为实验不是我做的,是一个师弟做的,老师让我来分析。师弟用的分型是这样的
抗体CD3、CD56、CD16、NKB1、CD94、CD57;
NKB1+、CD94-为matureNK
NKB1+、CD94+为intermediate matureNK
NKB1-、CD94+为maturingNK
CD57+为terminally differeantiated NK

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发表于 2020-4-11 00:15:50 | 显示全部楼层
这个是流式图
图片1.jpg
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 楼主| 发表于 2020-4-11 15:00:21 | 显示全部楼层

NKB1=CD158e1,这个应该跟成熟无关吧?不知道你参考的是哪篇文献的依据呢?
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发表于 2020-4-11 19:42:12 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-4-11 15:00
NKB1=CD158e1,这个应该跟成熟无关吧?不知道你参考的是哪篇文献的依据呢? ...

这个分型是BD公司的一个人设计的。参考文献不太清楚。
如果NKB1不能用来分型,那我是否可以这样进行分型
CD3-CD56bright/+CD16- CD94+   immature
CD3-CD56bright/+CD16+CD94+  intermediate mature(maturing)
CD3-CD56dim/- CD16+CD94-   mature
CD3-CD56dim/- CD16+CD94-CD57+ terminally differeantiated
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 楼主| 发表于 2020-4-14 15:20:26 | 显示全部楼层
laogong 发表于 2020-4-11 19:42
这个分型是BD公司的一个人设计的。参考文献不太清楚。
如果NKB1不能用来分型,那我是否可以这样进行分型
...

可以的   d=====( ̄▽ ̄*)b
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发表于 2020-4-14 23:48:51 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-4-14 15:20
可以的   d=====( ̄▽ ̄*)b

谢谢倪老师!
你知道活性/增殖/凋亡/焦亡/自噬的区别吗?——点击了解细胞健康检测全面方案
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