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[细胞因子检测] BD红裂液和PMA刺激匹配吗?

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发表于 2011-3-23 19:54:14 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
尝试直接用全血(不用分离PBMC)检测IL-17的频率。用PMA+离子霉素和gorg-stop阻断剂,培养5h,当加完表面标志后,用BD红裂液裂解红细胞,裂解后离心,发现细胞已经凝集成片状了,类似于像一个“皮屑”,加入PBS后重选,沉淀怎么也不能吹散?不知道坛子里的朋友们碰到这码子事没有,BD红裂液是work的,上午才用它裂解了未经刺激的全血,效果很好!是不是就不能用全血法检测IL-17或者其他胞内因子?请帮我出出招?

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发表于 2011-3-23 20:34:15 | 显示全部楼层
最好先提取淋巴细胞后,再做此实验,似乎破膜固定剂影响红裂解液的效果.
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发表于 2011-3-23 21:27:31 | 显示全部楼层
全血法检测细胞因子肯定是可行的,这个你不需要怀疑,见:http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=216
关于加裂解液之后成絮状的问题,我以前偶尔碰到过几次,应该总体来说很少见,基本上是一些淋巴瘤或者骨髓瘤病人,过滤之后,结果就不理想了。我估计是跟标本血浆中的免疫球蛋白物质有关吧。
至于处理步骤,我建议还是按照细胞因子染色步骤来吧,不要用裂解液,因为试剂盒的permeabilization buffer里面已经包含了裂解红细胞的成分。
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发表于 2011-3-23 21:34:10 | 显示全部楼层
这个我还没做,但是我提PBMC后若是有红细胞,会用裂解液,裂解后细胞就是你所描述的那样,片状、吹不散。据其他人分析,这样的细胞可能是死了。
我觉得是红细胞裂解液使用方法不当,因为我就是使用方法不当出现这种情况的。我见过师姐使用红细胞裂解液不按说明做,加的量少了,结果红细胞裂解不全,白细胞出不来。
建议你严格按说明做一做,不要怕浪费裂解液。
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 楼主| 发表于 2011-3-24 18:16:55 | 显示全部楼层
我倒觉得估计跟PMA活化后对红细胞膜的影响有关。有说法是PMA使红细胞的膜更有韧性,使用方法的话,觉得应该没有多大差别,跟没有活化的全血是一样的做法?没有活化的全血都没有问题。裂解得很好!确实比国产的红裂液好?但是PMA活化或者离子霉素或者阻断剂得有影响?
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