小鼠单核巨噬细胞

wangsiqiqiqi

大家好，有关小鼠脾脏细胞单核巨噬细胞染色问题想请教：

染色的样本为小鼠脾细胞，抗体和FCR阻断剂都是Biolegend的。共染破膜管和共染未破膜管细胞来自同一只小鼠，同一次实验

①细胞复苏后100ul细胞中加2ul FCR阻断剂10min。

②染IFNLR-FITC（间接染色）。后用含2%FBS的PBS（SB）清洗2次

③染表面抗体CD45-Percp-cy5.5、F4/80-PE、CD11B-BV510、LY-6C-BV421、CCR2-APC、CCR5-PE-CY7。4℃，孵育30min，后SB清洗2次。

④未破膜共染管直接SB重悬；固定破膜共染管：固定破膜，后染CD206-PE-CF594，破膜液洗一次，SB洗一次；

⑤重悬上机

问题：本想看固定破膜会不会减少表面抗原的检测，但是发现固定破膜后一些表面抗原检测到的比例反而增多，这是什么原因？因为之前做过的一般都是固定破膜会导致表面的抗原检测减弱或者没有影响。（做了两次实验，都是一样的结果，破膜后检测到的IFNLR、F4/80、CD11B、LY-6C阳性细胞均较未破膜的多）

感谢！

niwanmao

破膜后，荧光信号会偏移，所以 需要 做好胞内标记的FMO对照。
此外，你这里CD11b信号的增多，我怀疑与Lymphocytes门有关，破膜之后粒细胞SSC下移，进入淋巴细胞门内，导致增多。

wangsiqiqiqi

niwanmao 发表于 2020-6-8 19:07
破膜后，荧光信号会偏移，所以 需要 做好胞内标记的FMO对照。
此外，你这里CD11b信号的增多，我怀疑与Lymph ...

倪老师，感谢您的解答！我重新圈了SSC-FSC的门，发现的确是破膜对CD11b的影响导致的。再次感谢~