单核细胞胞内IL-10的检测问题

南瓜妹妹

近期在做人单核细胞胞内IL-10的检测，但没有刺激出来，不知道是什么原因。大概步骤是按照BD的一个单核细胞胞内因子检测步骤来的，方法是人全血100ul用LPS 1ug/ml BFA 10ug/ml，刺激4小时后检测，表染30min，裂红10min，胞内因子检测用的是biolenged的试剂盒，其他因子可以检测出来，但是IL-10没有检测出来，我想请教一下IL-10在单核细胞的表达量大概是多少呢？没有刺激出来是LPS的浓度低了，刺激时间短了吗？还是需要加别的刺激剂呢？我看有篇文献没有加LPS直接用FBA 4h就检测出来单核细胞内IL-10的表达，不知道是怎么回事

niwanmao

破膜剂的问题吗？

南瓜妹妹

niwanmao 发表于 2020-6-23 12:17
破膜剂的问题吗？

用的是biolenged的破膜试剂盒，按照说明书来的，固定破室温20min，洗两次，胞内抗体室温孵育20min，我延长到30min了，是新买的试剂盒

niwanmao

南瓜妹妹 发表于 2020-6-23 12:38
用的是biolenged的破膜试剂盒，按照说明书来的，固定破室温20min，洗两次，胞内抗体室温孵育20min，我延 ...

可以考虑换一种破膜剂再试试。

南瓜妹妹

niwanmao 发表于 2020-6-24 08:46
可以考虑换一种破膜剂再试试。

倪老师，我延长了刺激时间，发现是可以刺激出来的，按照之前你发的一个帖子的刺激时间

niwanmao

南瓜妹妹 发表于 2020-6-26 09:48
倪老师，我延长了刺激时间，发现是可以刺激出来的，按照之前你发的一个帖子的刺激时间 ...

哦，那就好。

南瓜妹妹

niwanmao 发表于 2020-6-26 21:22
哦，那就好。

倪老师，您帮我看看这是我染的单核细胞胞内IL-10的结果，这个结果是有问题吗？他们说IL-10表达没有这么高，我用的是LPS刺激18h后固定破膜，用的是biolenged的试剂套装

niwanmao

南瓜妹妹 发表于 2020-9-3 10:48
倪老师，您帮我看看这是我染的单核细胞胞内IL-10的结果，这个结果是有问题吗？他们说IL-10表达没有这么高 ...

单核细胞可以这么高的。IL-10表达的单核，是alternative activated

南瓜妹妹

niwanmao 发表于 2020-9-3 11:33
单核细胞可以这么高的。IL-10表达的单核，是alternative activated

好的，谢谢倪老师！那我这个门画的有问题吗？有老师说这个明显压到绿色细胞了就是不对，必须有明显的分群，但我都确实是根据同型或者FMO来画门的

niwanmao

南瓜妹妹 发表于 2020-9-3 12:37
好的，谢谢倪老师！那我这个门画的有问题吗？有老师说这个明显压到绿色细胞了就是不对，必须有明显的分群 ...

没错的。