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[流式相关软件] 关于细胞凋亡检测的问题

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发表于 2020-7-3 16:39:16 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏5流星未解决
大家好,我最近在做细胞凋亡。用的染料是TMRM+SYTOX RED +ANNEXIN V. 如图所示。 图片1.png
黑色代表sytox+annexin v+, 蓝色代表TMRM+, 红色代表annexin V+
想请问大家,TMRM+的细胞群其中一部分被认为是SYTOX+好像不太对(设门是根据FMO control)?是因为我的补偿没调好吗?
谢谢

图片1.png
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发表于 2020-7-3 21:38:35 | 显示全部楼层
FMO对照主要是为了排除补偿带来的影响,不能排除所有的背景干扰。所以考虑你的实验里面,还有其它背景影响。
我的建议是新鲜样本来做这一块的阴性对照。
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 楼主| 发表于 2020-7-4 01:41:23 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-7-3 21:38
FMO对照主要是为了排除补偿带来的影响,不能排除所有的背景干扰。所以考虑你的实验里面,还有其它背景影响 ...

感谢倪老师的解答,新鲜样本的意思是?我的样本是细胞系
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发表于 2020-7-4 10:15:46 | 显示全部楼层
Chemericcat 发表于 2020-7-4 01:41
感谢倪老师的解答,新鲜样本的意思是?我的样本是细胞系

新鲜样本我指的是新鲜采集的全血样本,染一下sytox red确定界限。
如果你用的是细胞系,并且培养状态良好,那么应该基本上都是阴性的,所以我觉得FMO在这里是反映不了真实界限的,因为死细胞和活细胞能够很好分群的。
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 楼主| 发表于 2020-7-6 20:49:52 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-7-4 10:15
新鲜样本我指的是新鲜采集的全血样本,染一下sytox red确定界限。
如果你用的是细胞系,并且培养状态良好 ...

所以我在做FMO的时候一般会加入活细胞mix一些加热后的死细胞,但即使这样,在用到实验样本的时候还是会有些对应不上。
倪老师您建议我换sigle staining作为control吗
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 楼主| 发表于 2020-7-6 20:53:18 | 显示全部楼层
本帖最后由 Chemericcat 于 2020-7-6 20:54 编辑
Chemericcat 发表于 2020-7-6 20:49
所以我在做FMO的时候一般会加入活细胞mix一些加热后的死细胞,但即使这样,在用到实验样本的时候还是会有 ...

如图所示
SCAMP3-20 NO.4-Layout.jpg
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发表于 2020-7-7 18:30:23 | 显示全部楼层

活细胞+死细胞,那不叫FMO,而是阴性对照和阳性对照混合了。
单纯活细胞的染色结果如何?
混合样本里面哪群是死,哪群是活?
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 楼主| 发表于 2020-7-8 18:00:12 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-7-7 18:30
活细胞+死细胞,那不叫FMO,而是阴性对照和阳性对照混合了。
单纯活细胞的染色结果如何?
混合样本里面哪 ...

我曾经用过活细胞染色,但里面还是会有部分死细胞。。。如图1所示,右边那群较大的是活细胞,左边那群较小的死细胞.图2是我的FMO-Sytox red conrol 08-Jul-2020-Layout.jpg

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 楼主| 发表于 2020-7-8 18:01:55 | 显示全部楼层
Chemericcat 发表于 2020-7-8 18:00
我曾经用过活细胞染色,但里面还是会有部分死细胞。。。如图1所示,右边那群较大的是活细胞,左边那群较 ...


                               
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08-Jul-2020-Layout.jpg
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发表于 2020-8-31 16:40:05 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-7-3 21:38
FMO对照主要是为了排除补偿带来的影响,不能排除所有的背景干扰。所以考虑你的实验里面,还有其它背景影响 ...

老师您好,我想检测肺单个核细胞中的 中性粒细胞的凋亡实验,我需要先对细胞进行表染处理,CD11b,Ly6G,然后按着Annexin V的试剂盒继续操作可以不,荧光抗体和调往试剂盒错开搭配。
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