小鼠肺巨噬细胞CD206

多纳泰罗豪

各位前辈看一下 我这样圈门是否合适，按照FMO进行圈门，FMO没染CD206其他的都正常。我做的小鼠肺组织巨噬细胞。圈门策略，样本都在上图，各位指点一下，圈出来的CD206比例有点高，老师不敢相信我做的了

niwanmao

你这管FMO和实验管的抗体搭配分别是如何的？另外，是否进行过Fc阻断？

多纳泰罗豪

niwanmao 发表于 2020-7-20 15:53
你这管FMO和实验管的抗体搭配分别是如何的？另外，是否进行过Fc阻断？

细胞进行了Fc封闭。FMO： CD45+CD11c+F4/80+ (没染CD206) ，样品管 CD45+CD11c+F4/80+CD206

niwanmao

多纳泰罗豪 发表于 2020-7-20 16:00
细胞进行了Fc封闭。FMO： CD45+CD11c+F4/80+ (没染CD206) ，样品管 CD45+CD11c+F4/80+CD206 ...

但是从图形看，FMO的荧光渗漏，并非是背景的主要原因，并且Fc也不是。
所以，后续可以考虑找一个和你现在用的CD206完全匹配的同型对照，虽然同型对照不是我们提倡的，但是当Fc和FMO均无法消除背景的时候，只能把它用上试试了。

多纳泰罗豪

niwanmao 发表于 2020-7-22 07:29
但是从图形看，FMO的荧光渗漏，并非是背景的主要原因，并且Fc也不是。
所以，后续可以考虑找一个和你现在 ...

老师您好，也就死我这次的结果不可信是吗？

niwanmao

多纳泰罗豪 发表于 2020-7-22 14:31
老师您好，也就死我这次的结果不可信是吗？

是的，设门不能反映真实情况。

多纳泰罗豪

niwanmao 发表于 2020-7-22 22:59
是的，设门不能反映真实情况。

老师，那这次结果还有补救的可能性吗？同型对照目前我们实验室还没有，那我下次做没有同型对照的基础上，我该怎么更好的处理实验

niwanmao

多纳泰罗豪 发表于 2020-7-24 11:54
老师，那这次结果还有补救的可能性吗？同型对照目前我们实验室还没有，那我下次做没有同型对照的基础上， ...

你根据后面三个获取细胞数量多的几管设门，就设在分群明显处，然后以此十字门，复制到前面几个细胞少的图上：

多纳泰罗豪

niwanmao 发表于 2020-7-24 21:39
你根据后面三个获取细胞数量多的几管设门，就设在分群明显处，然后以此十字门，复制到前面几个细胞少的图 ...

好的  谢谢老师 那这个设门位置就随着细胞形态而发生变化了是吗？

niwanmao

多纳泰罗豪 发表于 2020-7-29 18:01
好的  谢谢老师 那这个设门位置就随着细胞形态而发生变化了是吗？

同一类细胞，形态上一般不会变化太大，是可以通用的。如果颗粒增多明显，那么自发荧光是会增高的。