马上检测Th1, Th2, Th17细胞了,实验可以这样设吗:
一 收集数据的时候可以做这样的设置吗?
1. Th1 细胞:
unstained PBMC; PerCP-Cy™5.5-CD4 stained PBMC; FITC-IFN-γstained PBMC;
PerCP-Cy™5.5-CD4 and FITC-IFN-γstained PBMC;
2. Th17细胞: unstained PBMC; PerCP-Cy™5.5-CD4 stained PBMC; PE-IL-17A stained PBMC;
PerCP-Cy™5.5-CD4 and PE-IL-17A stained PBMC;
3. Treg细胞: unstained PBMC; PerCP-Cy™5.5-CD4 stained PBMC; PE-CD25 stained PBMC; FITC-CD127 PBMC; PerCP-Cy™5.5 CD4 and PE-CD25 stained PBMC; PerCP-Cy™5.5-CD4 and FITC-CD127 PBMC; PE-CD25 and FITC-CD127 PBMC; PerCP-Cy™5.5-CD4 + PE-CD25 + FITC-CD127 stained PBMC;
二 PMA 50 ng/mL+Ionomycin 1 μg/mL + 5 µg/ml BFA刺激PBMC的时间是多少?4个小时够吗?
三 当PBMC刺激结束后,细胞表面染色,固定,穿孔,细胞内染色后,可以保存在4度过夜,第二天再收集数据吗? 如果是这样,细胞用什么保存呢?是用PBS还是细胞破膜液保存细胞过夜?
非常感谢。
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