Th细胞这样设置实验可以吗？

cellprobe

马上检测Th1, Th2, Th17细胞了，实验可以这样设吗：


一  收集数据的时候可以做这样的设置吗？
1. Th1 细胞：
unstained PBMC;   PerCP-Cy™5.5-CD4 stained PBMC;  FITC-IFN-γstained PBMC;

PerCP-Cy™5.5-CD4 and FITC-IFN-γstained PBMC;

2. Th17细胞：

unstained PBMC;   PerCP-Cy™5.5-CD4 stained PBMC;  PE-IL-17A stained PBMC;

PerCP-Cy™5.5-CD4 and PE-IL-17A  stained PBMC;

3. Treg细胞：

unstained PBMC;   PerCP-Cy™5.5-CD4 stained PBMC;  PE-CD25 stained PBMC;  FITC-CD127 PBMC;

PerCP-Cy™5.5 CD4 and PE-CD25 stained PBMC;  PerCP-Cy™5.5-CD4 and FITC-CD127 PBMC;

PE-CD25 and FITC-CD127 PBMC;

PerCP-Cy™5.5-CD4 + PE-CD25 + FITC-CD127 stained PBMC;

二  PMA 50 ng/mL+Ionomycin 1 μg/mL + 5 µg/ml BFA刺激PBMC的时间是多少？4个小时够吗？

三 当PBMC刺激结束后，细胞表面染色，固定，穿孔，细胞内染色后，可以保存在4度过夜，第二天再收集数据吗？

如果是这样，细胞用什么保存呢？是用PBS还是细胞破膜液保存细胞过夜？

非常感谢。

niwanmao

一、二可以
三还是建议收集细胞马上做，不建议第二天做。