想问一下大神，这几幅流式图是否正常，感谢！

diandianrourou

前一段咨询了肝脏、肠道固有层流式细胞的相关问题，终于做了预实验，摸了protocol，所以想问几个问题。1：之前分离肝脏淋巴细胞，裂红后用的淋巴细胞提取液，发现分离的大部分都是碎片，后不用不用裂红，采用30%percoll和70%pecoll进行分离，然后CD45圈门，不知是否合适，因为看的文章里都是要裂红的。
2:大肠和小肠用的是先预消化去除黏膜，后消化得到固有层细胞悬液，用percoll进行分离，同样的protocol为什么小肠结果很差，大肠很好呢。
3.这一次大肠用的是100000个细胞做的，其他都是10000，大肠在SSC和FSC图上出现了三团细胞，如果分析ILC和CD4 T细胞，是圈右侧两团细胞好，还是只圈右侧一团好呢？
4.另外这五个部分，除了小肠的很多碎片，其他是不是都还好。
感谢感谢！

一席繁荒

我们做小鼠解刨的时候也发现类似的问题，组织单细胞悬液的制备方法不知道楼主是怎么做的。我们的方法是：
1、在冰上用剪刀和镊子将称取的组织剪成1-3mm^3大小；取50ml离心管，套上40 µm Cell Strainer，将称取的组织倒在40 µm Cell Strainer上；
2、用2ml注射器轻柔快速研磨，并用PBS将滤膜上细胞冲洗下去，用PBS将液细胞悬液补足至20ml。将研磨获得的细胞悬液，1500rpm离心5min
3、弃上清，加入2ml红细胞裂解液，重悬细胞后37℃消化3 min。1500 rpm离心5min，弃上清。
4、加入1ml PBS重悬，并对细胞计数，备用备用检测

niwanmao

如果用Percoll，就不能用红细胞裂解液，因为裂红步骤多少会对白细胞有点影响，从而影响提取效果。
所以要么只裂红，不用Percoll；要么只用Percoll提取。
但是我个人建议只用裂红法（如果组织表面血液洗干净，红细胞没有的话，根本不需要裂红）。

至于这几个样本，看上去大肠的细胞最多，但这些细胞里面有多少是有效的，还真看不好，因为你没用CD45设门，所以看不出白细胞占多少。
至于其它几个，还行，但是还是有必要提高效果。