FITC染色后甲醛固定问题

plity

请教各位老师，我染得表面MARKER FITC荧光素，染完后甲醛固定全部呈现为阳性信号，甲醛固定对FITC是不是有影响还是增加了本身的自发荧光造成的，不固定直接上机这种假阳性结果消失，希望哪位老师能否帮我解惑

niwanmao

甲醛固定会增加非特异性信号，所以不建议固定，而是染好色直接上机。
另外，你这里的图片没有上传。

plity

niwanmao 发表于 2020-11-17 08:29
甲醛固定会增加非特异性信号，所以不建议固定，而是染好色直接上机。
另外，你这里的图片没有上传。 ...

感谢老师的回答，我做的是骨髓巨核倍体分析，也就是乙醇固定骨髓所有细胞后用巨核细胞CD41筛选出巨核群，再对巨核进行PI荧光分析，但是我发现乙醇固定和甲醛固定都可以导致阴性对照出现较强的荧光信号，这时对CD41染色造成很大干扰，无法看到CD41阳性群。
如果不固定又无法完成PI染色，感觉像是进入了死胡同。我的CD41是FITC荧光，是不是太弱了才会被自发荧光覆盖，老师您有没有什么好的办法。我打算换一下较强的荧光染料试试

niwanmao

plity 发表于 2020-11-17 11:45
感谢老师的回答，我做的是骨髓巨核倍体分析，也就是乙醇固定骨髓所有细胞后用巨核细胞CD41筛选出巨核群， ...

如果同时做DNA含量和表面标记，建议不要用PI，因为涉及到乙醇固定和破膜。
可以改用7-AAD或Hoechst系列染料。