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[结构和原理] 关于流式检测JC-1观察线粒体的膜电位情况问题

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 楼主| 发表于 2020-12-15 21:20:53 | 显示全部楼层 |阅读模式
2流星
背景介绍:
在线粒体膜电位较高时,JC-1聚集在线粒体的基质(matrix)中,形成聚合物(J-aggregates),可以产生红色荧光。
在线粒体膜电位较低时,JC-1不能聚集在线粒体的基质中,此时JC-1为单体(monomer),可以产生绿色荧光。

JC-1单体的最大激发波长为514nm,最大发射波长为529nm;
JC-1聚合物(J-aggregates)的最大激发波长为585nm,最大发射波长为590nm。


问题1:
大家好我最近在做JC-1检测线粒体膜电位的实验所用的细胞是A549 细胞。看了别人的文章里面的施压结果都是如下图所示的。
屏幕快照 2020-12-15 21.05.24.png
那么问题来了,正常细胞(左上图的右上角细胞),就是细胞的线粒体的膜电位都是正常的,因此是都是红色,但是都是红色的不应该是在左上图的左上角吗,同理纯绿色的应该在右下角(这个是对的,对于我的思路)。右上角象限的细胞不是红色和绿色双阳性的细胞群吗。

问题2:
我用做的数据在flowjo软件里面。通过 屏幕快照 2020-12-15 21.18.13.png 检测样本质量。发现: 屏幕快照 2020-12-15 21.18.58.png 都是红色的。不知道是流式细胞技仪没有调试好 还是其他的原因,还请各位大佬赐教。这个问题困扰了我好久,若能解决,也算是功德无量啊。。。跪谢,跪谢

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发表于 2021-4-28 02:22:45 | 显示全部楼层
个人经验,对细胞诱导凋亡后,我在荧光显微镜下看过,正常组也能观察到绿色荧光,但是凋亡或者死亡明显的细胞,在镜下很难看到红荧光,主要是明显的绿荧光。
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发表于 2021-4-28 08:23:19 | 显示全部楼层
这个问题居然之前漏掉了。
其实背景里面的单体、聚合,两者本就是一个统计学上的相对情况,不是绝对的,所以反映到流式图,会呈现这么一个与你理解不同的分布。看线粒体膜电位降低的比例,主要看右下象限。
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