关于流式检测JC-1观察线粒体的膜电位情况问题

pengwenpan

背景介绍：
在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以产生红色荧光。
在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体(monomer)，可以产生绿色荧光。

JC-1单体的最大激发波长为514nm，最大发射波长为529nm；
JC-1聚合物(J-aggregates)的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。


问题1:
大家好我最近在做JC-1检测线粒体膜电位的实验所用的细胞是A549 细胞。看了别人的文章里面的施压结果都是如下图所示的。

那么问题来了，正常细胞（左上图的右上角细胞），就是细胞的线粒体的膜电位都是正常的，因此是都是红色，但是都是红色的不应该是在左上图的左上角吗，同理纯绿色的应该在右下角（这个是对的，对于我的思路）。右上角象限的细胞不是红色和绿色双阳性的细胞群吗。

问题2:
我用做的数据在flowjo软件里面。通过 检测样本质量。发现： 都是红色的。不知道是流式细胞技仪没有调试好 还是其他的原因，还请各位大佬赐教。这个问题困扰了我好久，若能解决，也算是功德无量啊。。。跪谢，跪谢

zxt2009

个人经验，对细胞诱导凋亡后，我在荧光显微镜下看过，正常组也能观察到绿色荧光，但是凋亡或者死亡明显的细胞，在镜下很难看到红荧光，主要是明显的绿荧光。

niwanmao

这个问题居然之前漏掉了。
其实背景里面的单体、聚合，两者本就是一个统计学上的相对情况，不是绝对的，所以反映到流式图，会呈现这么一个与你理解不同的分布。看线粒体膜电位降低的比例，主要看右下象限。