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[其它] THP-1诱导极化巨噬细胞

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 楼主| 发表于 2020-12-19 21:18:22 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
各位老师好,用THP-1诱导极化成M1和M2,结果发现加PMA之后,一半的细胞都没有贴壁,而用CD68/CD86/CD163检测M1和M2的时候,均没有阳性比例。能帮忙分析下是什么原因吗?正常情况下,诱导成M0,贴壁的比例是多少呢?

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发表于 2020-12-20 09:57:37 | 显示全部楼层
先跟经典文献对照一下看看你的实验条件是否正确?
链接:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4545815/
实验条件简述:
THP-1与150 nM PMA 孵育24小时,然后在RPMI培养基中孵育24小时,将THP-1单核细胞分化为巨噬细胞M0。
用20 ng/ml IFN-γ 和10pg/ml LPS 孵育,诱导M0极化为M1。
用20 ng/ml的IL-4和20 ng/ml的IL-13共孵育,诱导M0极化为M2。

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 楼主| 发表于 2020-12-21 17:53:27 | 显示全部楼层
本帖最后由 wmj123456 于 2020-12-21 17:56 编辑

倪老师,您好,我的诱导和极化方法跟您上面写的在用量方面有点差别,但是是根据一篇中文文献的方法,他们是做出来的了。加完PMA之后,有细胞是悬浮的,没有贴壁,我发了2张图,分别是全部收集的,和只收集贴壁细胞的,结果如下。理论上,加PMA之后,大部分细胞都是贴壁了吧?我的这种情况,是否说明在M0这一步就出问题了?



只收集贴壁.png
全部收集.png
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发表于 2020-12-22 15:23:31 | 显示全部楼层
wmj123456 发表于 2020-12-21 17:53
倪老师,您好,我的诱导和极化方法跟您上面写的在用量方面有点差别,但是是根据一篇中文文献的方法,他们是 ...

参考我前面给的那篇文献做一下调整看看。
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 楼主| 发表于 2020-12-22 18:28:53 | 显示全部楼层
本帖最后由 wmj123456 于 2020-12-22 18:43 编辑
niwanmao 发表于 2020-12-22 15:23
参考我前面给的那篇文献做一下调整看看。

好的,谢谢倪老师。刚看到您们发表的一篇关于THP-1诱导极化的文章,真是太暖心啦。不过有个问题还没明白,用PMA刺激成M0的时候,大部分的细胞都是贴壁了吧?至少也是90%的都会贴壁吧?
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发表于 2021-4-30 11:45:05 | 显示全部楼层
wmj123456 发表于 2020-12-22 18:28
好的,谢谢倪老师。刚看到您们发表的一篇关于THP-1诱导极化的文章,真是太暖心啦。不过有个问题还没明白, ...

你好,我也在用PMA使thp-1诱导M0,是会有90%贴壁的哈。

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