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[淋巴细胞相关] 请问小鼠外周血裂红怎么才能裂解充分?

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发表于 2020-12-24 17:04:22 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏2流星未解决
红细胞裂解液用的是BD公司试剂#cat.555899#双蒸水配制成1X。
我用50ul 1%肝素抗凝采集的50ul小鼠外周血,3000RPM 4℃ 10min 离心去上清后,
用 1X 红细胞裂解液 1.5ml 室温避光孵育10分钟后400g 4℃ 5min 离心。
去上清发现红色的沉淀,同样的再加裂解液1.5ml 裂红10分钟离心后还是红色的沉淀。
最后上机发现很多红细胞,我想要的淋巴细胞已经看不到分群了,请问怎么解决?


                               
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2020-12 Lpr mice 7w before MSC_12-21 G2 7W 8515.fcs.png
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2020-12-24 20:24:25 | 显示全部楼层
裂解液可用更大体积的,例如3ml或5ml,实现更好的裂解。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2022-12-28 14:31:03 | 显示全部楼层
50ul的小鼠血用10ml的裂红液(Biolegend,不加固定液的)裂5-10分钟即可比较好的裂解。要是1.5ml离心管的话最多只能做10ul小鼠血。裂红时间过长会影响淋巴粒细胞分群。
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发表于 2022-12-28 20:17:42 | 显示全部楼层
H2O 发表于 2022-12-28 14:31
50ul的小鼠血用10ml的裂红液(Biolegend,不加固定液的)裂5-10分钟即可比较好的裂解。要是1.5ml离心管的话 ...

赞同,这个图看起来是裂红太久,细胞都碎成碎片了
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发表于 2024-6-26 16:11:51 | 显示全部楼层
用的同款裂解液,也是弃血浆的全血,按照1:20加裂解液,室温裂解20min,期间让其振摇,裂解的还可以。可以试试。裂解液配制看是否有问题,配制后避光静置至室温。细节注意一下。裂解的合适,裂解离心后会看到明显白色沉淀。

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流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2024-7-3 15:53:07 | 显示全部楼层
第一,你可能用的血的量有点太少了,50微升小鼠的血提供不了多少白细胞,弃上清的时候不要吸,直接倒扣在吸水纸上。另外,看裂红的样子,你的裂红液可能有点小问题,这个血量是可以看到白膜的。我1ml的血可以裂解10min,你的没有必要裂解那么久,有点红细胞就有了,上机就上了,切阈值是可以切掉的
第二,你考虑一下你的fsc ssc是否合适,是不是没有拉开呢?建议从我说的两个问题排查一下

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