请问小鼠外周血裂红怎么才能裂解充分？

EthanPun

红细胞裂解液用的是BD公司试剂#cat.555899#双蒸水配制成1X。
我用50ul 1%肝素抗凝采集的50ul小鼠外周血，3000RPM 4℃ 10min 离心去上清后，
用 1X 红细胞裂解液 1.5ml 室温避光孵育10分钟后400g 4℃ 5min 离心。
去上清发现红色的沉淀，同样的再加裂解液1.5ml 裂红10分钟离心后还是红色的沉淀。
最后上机发现很多红细胞，我想要的淋巴细胞已经看不到分群了，请问怎么解决？

                               
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niwanmao

裂解液可用更大体积的，例如3ml或5ml，实现更好的裂解。

H2O

50ul的小鼠血用10ml的裂红液（Biolegend,不加固定液的）裂5-10分钟即可比较好的裂解。要是1.5ml离心管的话最多只能做10ul小鼠血。裂红时间过长会影响淋巴粒细胞分群。

超级布丁

H2O 发表于 2022-12-28 14:31
50ul的小鼠血用10ml的裂红液（Biolegend,不加固定液的）裂5-10分钟即可比较好的裂解。要是1.5ml离心管的话 ...

赞同，这个图看起来是裂红太久，细胞都碎成碎片了

明珠

用的同款裂解液，也是弃血浆的全血，按照1:20加裂解液，室温裂解20min,期间让其振摇，裂解的还可以。可以试试。裂解液配制看是否有问题，配制后避光静置至室温。细节注意一下。裂解的合适，裂解离心后会看到明显白色沉淀。

CPUSnape

第一，你可能用的血的量有点太少了，50微升小鼠的血提供不了多少白细胞，弃上清的时候不要吸，直接倒扣在吸水纸上。另外，看裂红的样子，你的裂红液可能有点小问题，这个血量是可以看到白膜的。我1ml的血可以裂解10min，你的没有必要裂解那么久，有点红细胞就有了，上机就上了，切阈值是可以切掉的
第二，你考虑一下你的fsc ssc是否合适，是不是没有拉开呢？建议从我说的两个问题排查一下