胞内活性氧检测

暗夜星辰

老师同学们，请问一下，做乳酸菌的活性氧检测，菌体密度10 6 次方，染料用的DCFH-DA(加入样品的最终浓度为20μM)，37℃避光孵育15min，流式检测后，发现样品的荧光强度比阴性对照的还要低，机器用的BECKMAN的，质控已过，这是什么原因导致的呢？用酶标仪测定荧光发现样品比阴性对照的荧光强度高1000左右。

niwanmao

需要你以下信息：
1、三管的FSC和SSC分群情况。
2、样本组的处理措施？
3、阳性对照是否有设置？
4、酶标仪你用了什么方法？

暗夜星辰

倪老师，抱歉，回复晚了，1、阴性和实验组的FSC和SSC已上传。2、并没有制作阳性对照组。3、试验通过冷冻干燥进行的处理，导致细胞内活性氧含量并不是很高，但以前做实验组和阴性对照也能分开。4、我直接将流式的上机样取了200μL，加入到荧光板中，激发502nm，发射528nm，进行测定，阴性组比实验组的荧光强度小于1000左右。

暗夜星辰

这个是以前做的，处理的方法和步骤是一样的，两组之间也是能分开的，难道是我的染料出现的问题么？

niwanmao

暗夜星辰 发表于 2021-1-5 12:56
这个是以前做的，处理的方法和步骤是一样的，两组之间也是能分开的，难道是我的染料出现的问题么？ ...

目前看来，FSC/SSC看不出明显异常，就只能怀疑实验步骤中的细节了。一个实验，如果无法做到三次一致的话，必有一次是存在问题的。
从染色步骤上回忆一下看看吧。

另外，酶标仪那种测出不准确的，酶标仪一般测的是匀质的液体，测细胞是不准确的。