PBMC培养七天后刺激检测其中的细胞亚群

生物菌

各位老师好：
我想问问基于我的实验设计，我需要将PBMC培养七天后再与同一个人的细胞进行共培养，检测PBMC中的细胞亚群，但是感觉亚群的图片很奇怪，有以下两个问题：
1.CD4不分群；
2.各个细胞因子阳性群很散；
3.使用的是FVD-BV506分群感觉也很奇怪；
麻烦各位老师！

wxd

CD4不分群，可能是由于CD4+T细胞受到刺激后，CD4分子内化到细胞内部，导致常规的胞外染色无法检测到CD4分子；建议尝试胞内染色。
其次，你的FSC/SSC图可能不是特别好，所以P1门没有精确的圈到PBMC，里边还有别的细胞，而你在看细胞因子时，没有分别观察PBMC和另一类细胞的细胞因子分泌，可能会由于两类细胞的差异导致细胞因子分泌差异很大，表现在图片上就是阳性群很分散。
FVD-BV506分群很奇怪，可能就是因为你的P1门没有画好。

生物菌

wxd 发表于 2021-1-19 18:53
CD4不分群，可能是由于CD4+T细胞受到刺激后，CD4分子内化到细胞内部，导致常规的胞外染色无法检测到CD4分子 ...

谢谢，想问问您有试过CD4+胞内染色么？就是固定破膜或者破核的时候再染？

wxd

我没有亲自上手做过，因为我是仪器管理员，学生做流式的时候是我帮忙做的，所以知道这个。