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[其它] 血小板激活实验

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 楼主| 发表于 2021-1-13 10:00:36 | 显示全部楼层 |阅读模式
2流星
各位老师好,小弟最近在做血小板激活实验,因为第一次做,遇到了不少问题,我们选的抗体是:cd41a-FITC, cd61-FITC, CD63-PE, CD62p-APC.因为是第一次做,我们只做了阴性对照和ADP激活的阳性对照:
1 关于画门的问题,我们做出来的图是图123这样的,我看和有些文献的不一样,不知道是不是这样画门的,还是我们参数选错了。

图1

图1

图3

图3

图2

图2

                   图1                                                                 图2                                                               图3
2 有关血小板比例的问题:我们画出的门血小板比例只有10%左右,有些只有5%左右。

图4

图4
   

图5

图5

                              图4                                                            图5
3 有关激活的问题:文献上说如果操作不小心,背景激活都能到50%,可是我们用了ADP去激活,血小板激活比例也只有5%左右。
我们现在严重怀疑自己哪里做错了,可是所有步骤又是按步骤一步一步来的,所以也不知道哪里出错了.... 想请教各位老师,这里哪里出了问题。

发表于 2021-1-13 12:37:18 | 显示全部楼层
CD41/CD61的散点图呢?
 楼主| 发表于 2021-1-13 17:55:50 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-1-13 12:37
CD41/CD61的散点图呢?

老师,我们没有用ssc和FITC筛血小板的细胞。就用了图1的ssc/fsc然后圈的血小板那群,图2就是第二个门,然后是图3的pe和apc的阳性图。抗体是:CD41a-FITC,CD61-FITC, CD63-PE, CD62p-APC。FITC我们买的invitrogen的,他们没有CD41a/CD61-FITC,所以买了CD41a-FITC,CD61-FITC两个抗体,一起加的。
发表于 2021-1-14 07:49:10 | 显示全部楼层
yinxl2020 发表于 2021-1-13 17:55
老师,我们没有用ssc和FITC筛血小板的细胞。就用了图1的ssc/fsc然后圈的血小板那群,图2就是第二个门,然 ...

我在怀疑的是R1门是否圈的对?所以需要通过CD41/CD61高表达来明确血小板群体。我看你的R1门内,CD41/CD61阳性只有很少,所以我怀疑是粘附了血小板的小的红细胞
 楼主| 发表于 2021-1-14 09:27:27 | 显示全部楼层
本帖最后由 yinxl2020 于 2021-1-14 09:29 编辑
niwanmao 发表于 2021-1-14 07:49
我在怀疑的是R1门是否圈的对?所以需要通过CD41/CD61高表达来明确血小板群体。我看你的R1门内,CD41/CD61 ...

老师,我们在做的时候也把全部细胞都全进来过,就是图1呈现的三块细胞群,我们都圈了。后面的FITC结果还不如这样圈的。老师我们准备再做一遍。看看是不是操作哪里出了问题。我想问下您,这次我们做的时候是不是要再多画一个门,横纵坐标设成ssc/FITC,这样看看纯阳的细胞?然后我把我们做的步骤上传了,您能帮忙看下吗?我们只是做的预实验,所以只有阴性组和阳性组。麻烦您了 屏幕截图 2021-01-14 092503.png 屏幕截图 2021-01-14 092528.png
我看您之前发的帖子,全血我们是从第三管开始做的血小板激活实验。
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