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[标本处理] 求大神告知流式鉴定植物倍性出现此结果可能的原因

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 楼主| 发表于 2021-1-15 12:08:03 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
本帖最后由 cxy 于 2021-1-15 12:08 编辑

实验步骤:
1. 将洗净的嫩叶在预冷的培养皿(加入2ml解离液)中切碎
2. 20min后过滤到2ml离心管中
3. 4℃,3000r/min,5min,弃上清    (有绿色沉淀产生)
4. 加入500ul PBS 缓冲液,冲洗一次,4℃,3000r/min,5min,弃上清
5. 加入150ul解离液,混匀
6. 5min后加入100ul PI染色液(50ug/ml PI +0.5mg/ml RNA酶),30min后上机检测。
通道为Percp通道
请问:出现该结果的原因是未解离出细胞核还是其他问题?
请各位多多指点

纯样品未染色

纯样品未染色

纯样品未染色

纯样品未染色

纯样品染色

纯样品染色

纯样品染色

纯样品染色

样品加标参不染色

样品加标参不染色

样品加标参不染色

样品加标参不染色

样品加标参染色

样品加标参染色

样品加标参染色

样品加标参染色

标参不染色

标参不染色

标参不染色

标参不染色

标参染色

标参染色

标参染色

标参染色

第一遍过滤后

第一遍过滤后
 楼主| 发表于 2021-1-15 12:08:04 | 显示全部楼层
从图上看
未染色样品和染色样品没有很大差异
加标参和不加标参没有很大差异
请问这是因为细胞核未解离成功吗?
发表于 2021-1-16 11:55:52 | 显示全部楼层
1、检测通道请改为LIN模式。
2、其它通道表现如何?
 楼主| 发表于 2021-1-17 08:52:22 | 显示全部楼层
这是加入标参后PE通道的结果
加入标参PE通道.png
加入标参PE通道1.png
发表于 2021-1-18 07:54:45 | 显示全部楼层
cxy 发表于 2021-1-17 08:52
这是加入标参后PE通道的结果

PE或PerCP通道分别改为LIN模式显示看看。
 楼主| 发表于 2021-1-18 20:24:26 | 显示全部楼层
Percp通道
LIN模式
样品加标参-不染色-2.png
样品加标参-染色-2.png
样品加标参-不染色-3.png
样品加标参-染色-3.png
只有标参-不染色-2.png
只有标参-不染色-3.png
只有标参-染色-3.png
只有标参-染色-2.png
只有样品-不染色-2.png
只有样品-染色-2.png
只有样品-不染色-3.png
只有样品-染色-3.png
 楼主| 发表于 2021-1-18 20:34:15 | 显示全部楼层
PE通道
LIN模式
只有标参-染色-1.png
只有标参-染色-2.png
样品 标参-不染色-1.png
样品 标参-不染色-2.png
样品 标参-染色-1.png
样品 标参-染色-2.png
发表于 2021-1-19 08:38:40 | 显示全部楼层
cxy 发表于 2021-1-18 20:24
Percp通道
LIN模式

LIN模式下,把主群坐标做一下缩放调整,让主群显示在靠中间一些,便于观察峰的分布。
 楼主| 发表于 2021-1-21 19:26:26 | 显示全部楼层
老师你好,我又重新做了以下,您看这种情况是细胞核没有被解离出来,还是其他什么原因呢?
样品 标参染色-1.png 样品 标参染色-2.png 标参单染-1.png 标参单染-2.png 样品单染-1.png 样品单染-2.png 标参不染-1.png 标参不染-2.png 样品不染-1.png 样品不染-2.png
发表于 2021-1-22 15:34:49 | 显示全部楼层
cxy 发表于 2021-1-21 19:26
老师你好,我又重新做了以下,您看这种情况是细胞核没有被解离出来,还是其他什么原因呢?
...

不是这样看的,PI-A和PI-H形成一个散点图看。
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