Brent L. Wood手把手教你做AML MRD分析

niwanmao

这是Brent L. Wood新近发表在Current Protocols in Cytometry这个专辑上的Protocol，从方案、染色到「difference from normal」分析方法及其注意点，都一一阐述清楚。

Wood, B. L. (2020). Acute myeloid leukemia minimal residual disease detection: The difference from normal approach. Current Protocols in Cytometry, 93, e73. doi: 10.1002/cpcy.73

在此，我们仅将方案和「difference from normal」分析示例分享如下，更详细的内容，大家可下载PDF原文学习。
Acute Myeloid Leukemia Minimal Residual Disease Detection.pdf (8.04 MB, 下载次数: 24)

2021-1-18 15:40 上传

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方案
方案分三管。M1管旨在观察造血干细胞(CD34+，CD38low)进入每个主要细胞系的早期成熟情况。M2管用来观察早期骨髓单核细胞前体细胞向晚期成熟形式的成熟，并包括浆细胞样树突状细胞和嗜碱性细胞谱系的鉴定。M3管被设计用来鉴定T和NK细胞相关淋巴抗原在祖细胞群体上的异常表达，这是急性髓细胞白血病的常见异常类型。
特别是，CD34和CD38在每管中都包含在内，可以更好圈出造血干细胞上并评估其抗原变化。这三管共同构成了识别残留AML的综合策略。


分析步骤
### 1、排除不稳定信号


### 2、去粘连


### 3、排除碎片


### 4、圈原始和幼稚区域


### 5、看分化，找「Different from normal」
组合M1和M2，按前述设门，选出前体细胞区域之后，以如下散点图组合查看细胞分化，寻找异常表型的MRD，图中各类细胞颜色标识如下：
CD34+祖细胞(红色)、单核细胞(洋红色)、髓样细胞(绿色)、浆细胞(黄色)、嗜碱性粒细胞(紫色)、浆细胞样树突状细胞(青色)、MRD(蓝色)
注意，第5行第4列的CD34+祖细胞圈出来之后，右下角3×3的散点图，按照CD38和其它参数组合形成散点图矩阵，评估造血干祖细胞表型是否异常。