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[流式分选] 【流式分选技术请教】间标抗体用于流式分选

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发表于 2021-1-27 23:47:57 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏2流星已解决
想请教大家一下,我想用流式分选小鼠心脏组织细胞后进行后续实验,不需要培养。我的目标细胞一共有两个表面标记,一个是大鼠源的APC的直标抗体;另一个因为不是常见标记,只能购买到兔多抗的一抗。我想请教:① 如果一个抗体是小鼠直标抗体,另一个是兔多抗,该以什么样的顺序染色?可否一抗与直标抗体同时染,然后进行羊抗兔的二抗染色。②染色前是否需要封闭,如果封闭是否会影响直标抗体的结合?
还有一个关于流式分选的问题,如果我的细胞样本用磁珠进行一次富集,可以将目标细胞的得率从10%提高到20%,是否有必要先磁珠富集一下再进行后续染色?(因为我的磁珠不是直标,是采用biotin间标的方式,我担心如果先磁珠富集需要多次洗涤细胞,会损伤损失细胞。)

非常感谢!!

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间标和直标一起用,一般建议先染间标的一抗、二抗,充分洗涤后,再染直标的抗体。 一般分群如果良好,封闭不是必须的。但如果分群不好的话,分选效果也不会好。 至于事先富集,没有必要。10%的比例,对流式分选很轻松,即使是稀有细胞的分选,也不是问题。
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发表于 2021-1-27 23:47:58 | 显示全部楼层
间标和直标一起用,一般建议先染间标的一抗、二抗,充分洗涤后,再染直标的抗体。

一般分群如果良好,封闭不是必须的。但如果分群不好的话,分选效果也不会好。

至于事先富集,没有必要。10%的比例,对流式分选很轻松,即使是稀有细胞的分选,也不是问题。
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 楼主| 发表于 2021-1-29 20:04:54 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-1-27 23:47
间标和直标一起用,一般建议先染间标的一抗、二抗,充分洗涤后,再染直标的抗体。

一般分群如果良好,封闭 ...

明白了,非常感谢倪老师
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