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[细胞增殖] CFSE检测T细胞增殖

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 楼主| 发表于 2021-2-5 16:30:57 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
本帖最后由 Smile14 于 2021-2-5 16:48 编辑

我做的课题是与BiTE相关的,想做在抗原和BiTE存在下,促进T细胞增殖,但做了几次都没做出来差异
1.原先T细胞是PBMC来源,做了OKT3诱导,IL2+KBM581培养,培养很长时间后,与肿瘤细胞共培养(DMEM+FBS,未额外加IL-2)做的CFSE增殖发现3天基本峰与父代对比不移动;
2.后来,尝试使用刚分离的PBMCs直接与肿瘤细胞培养(未加IL-2),5天也没有移动;
3.最后,我们用了新分的PBMCs与肿瘤细胞培养(加IL-2),5天也没有移动。
4.染色条件:参照的Protocol文章 cfse protocal 翻译.pdf (474.81 KB, 下载次数: 18)

发表于 2021-2-6 22:05:22 | 显示全部楼层
浓度上面看起来问题不大,是不是时间不够长?
 楼主| 发表于 2021-2-7 11:05:12 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-2-6 22:05
浓度上面看起来问题不大,是不是时间不够长?

但这个我CFSE的电压是调比较高的,平时FL1的电压我们基本在250左右,这次调到了350左右;下次我试一下把染色时间提高或者拿一支新的CFSE染料依据站里分享的染色方法再做一次。
发表于 2021-2-7 12:18:45 | 显示全部楼层
Smile14 发表于 2021-2-7 11:05
但这个我CFSE的电压是调比较高的,平时FL1的电压我们基本在250左右,这次调到了350左右;下次我试一下把 ...

不是CFSE染色的问题,从细胞形态来看,T细胞没有增殖。应该用CD3、CD28、IL2增殖培养体系,且CD3一定要包被。
 楼主| 发表于 2021-2-7 16:37:40 | 显示全部楼层
tiger 发表于 2021-2-7 12:18
不是CFSE染色的问题,从细胞形态来看,T细胞没有增殖。应该用CD3、CD28、IL2增殖培养体系,且CD3一定要包 ...

老师您好,我这是做的双特异性抗体的,一侧靶向肿瘤TAA,一侧靶向CD3,本来想检测双特异性抗体促进T细胞增殖的,那下次我先做一个CD3/CD28 beads的阳参组吗?还是用ConA
发表于 2021-2-19 16:37:20 | 显示全部楼层
您好 我近期也再做CFSE染色淋巴细胞增殖实验,您用的什么软件分析的?
发表于 2021-2-21 09:16:20 | 显示全部楼层
开心小松鼠 发表于 2021-2-19 16:37
您好 我近期也再做CFSE染色淋巴细胞增殖实验,您用的什么软件分析的?

一般最常用的是Modfit软件。
发表于 6 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-2-21 09:16
一般最常用的是Modfit软件。

倪老师您好,能分享一篇关于modfit软件分析淋巴细胞增殖的文章吗?谢谢
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