小鼠MC38皮下瘤免疫微环境中CD4/CD8比例异常

Reyna · 发表于 2021-3-9 15:02:37

我做了3批小鼠，3批小鼠基本上都是CD8比例极高，有时候CD4还没有，最近做的小鼠流式分析CD8高达70%，查了很多资料，小鼠MC38皮下瘤基本是CD8:CD4是1:1.1左右，流式的老师说我的处理没有问题（详细的处理步骤见我分享的那篇protocol），可能是我这个组织就是这样的，但是我觉得自己做出来的结果和文献都不一样，数据可能有问题，所以想问下大家是否也有这样的结果？我目前看的文献，确实没有我这种CD8细胞比CD4细胞高这么多的

T细胞圈门

tiger · 发表于 2021-3-9 15:02:38

本帖最后由 tiger 于 2021-3-11 09:39 编辑

Reyna 发表于 2021-3-10 17:33
那老师，这个该怎么调整呢？是需要换死活燃料还是说CD3抗体

不是换CD3抗体，是降低死活染料用量或调低电压，使荧光信号可见。

niwanmao · 发表于 2021-3-9 19:47:18

看这里最下面的CD3门那里，感觉是不是CD3和CD4的补偿有点调的太过了，导致部分CD4+T掉到CD3阴性区域？从而最后导致CD4+T显著减少了。

tiger · 发表于 2021-3-10 11:40:50

把数据传上来，看看

Reyna · 发表于 2021-3-10 13:31:13

tiger 发表于 2021-3-10 11:40
把数据传上来，看看

老师，请问是什么数据呢？是FCS那个文件么？

Reyna · 发表于 2021-3-10 13:44:24

@niwanmao 倪老师，我反圈门回去看，发现CD3的圈门没问题，CD4还是在CD3阳性的淋巴细胞那里

tiger · 发表于 2021-3-10 14:01:15

Reyna 发表于 2021-3-10 13:31
老师，请问是什么数据呢？是FCS那个文件么？

是的，就是FCS文件

Reyna · 发表于 2021-3-10 14:08:21

niwanmao 发表于 2021-3-9 19:47
看这里最下面的CD3门那里，感觉是不是CD3和CD4的补偿有点调的太过了，导致部分CD4+T掉到CD3阴性区域？从而 ...

倪老师，我的CD3、CD4、CD8的配色是Alexa Fluor® 700 、FITC、APC，是不是因为荧光的相互干扰导致分型不准确？

niwanmao · 发表于 2021-3-10 15:11:47

Reyna 发表于 2021-3-10 14:08
倪老师，我的CD3、CD4、CD8的配色是Alexa Fluor® 700 、FITC、APC，是不是因为荧光的相互干扰导致分型不 ...

A700和APC是有补偿的，从你最后这两个图看，CD3本身就弱，再加上CD4有部分是CD3更弱，所以导致圈的CD4偏少，而CD8你可以再反设门看看在哪里。

Reyna · 发表于 2021-3-10 15:16:36

niwanmao 发表于 2021-3-10 15:11
A700和APC是有补偿的，从你最后这两个图看，CD3本身就弱，再加上CD4有部分是CD3更弱，所以导致圈的CD4偏少 ...

好的，谢谢倪老师

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