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[图片] 小鼠组织巨噬细胞和DC等细胞,应该如何设门?

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 楼主| 发表于 2021-3-15 17:03:22 | 显示全部楼层 |阅读模式

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平时,论坛中经常有站友拿着自己做的巨噬细胞或DC的实验结果图,来问为什么结果是这样子?其实很多主要是设门存在问题。
所以,在此从一篇引用率较高的文献中,取一幅好图分享如下:
result.jpg

区分正常小鼠肺组织髓系细胞亚群的设门策略。从酶消化的小鼠肺中分离细胞,剔除二倍体和碎片后,用CD45染色鉴定免疫细胞。
(A)较为详细的设门方案:
肺泡巨噬细胞(MΦ)(Siglec F+CD11b−CD11c+CD64+)、CD103+树突状细胞(CD11c+CD103+CD24+)、中性粒细胞(CD11b+Ly6G+)和嗜酸性粒细胞(Siglec F+CD11b+CD11c−)

(B)精简方案区分巨噬细胞和树突状细胞。
肺泡巨噬细胞和CD103+DC均被鉴定为CD11b−CD11c+细胞,之后用CD64和CD24进一步分群。
如有必要,MHC II可用于确认CD103+DC中的设门。
CD11b hi细胞上的门控可以将髓系细胞与不表达该标记的淋巴细胞(T和B细胞)或在中等表达该标记的淋巴细胞(NK细胞)分开。
粒细胞(中性粒细胞和嗜酸性粒细胞)可被排除为CD24+CD11c−,而CD11b+DC(CD11b+MHC II+CD11c+CD24−CD64−)、间质巨噬细胞(CD11b+MHC II+CD11 c+CD64+CD24−)、单核/未分化巨噬细胞(CD11b+MHC II−CD64+/−Ly6Clo)的区分可继续进行。


图片来源:Misharin, Alexander V et al. “Flow cytometric analysis of macrophages and dendritic cell subsets in the mouse lung.” American journal of respiratory cell and molecular biology vol. 49,4 (2013): 503-10. doi:10.1165/rcmb.2013-0086MA
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