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[流式protocol] 表面标记和胞内磷酸化蛋白都要做,如何做的好?

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 楼主| 发表于 2021-3-19 08:40:36 | 显示全部楼层 |阅读模式

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下图是人PBMC用不同的细胞因子处理后,同时对表面标记(CD16和CD19)和细胞内标记(磷酸化STAT6)进行染色,并显示淋巴细胞亚群磷酸化水平的差异。显然,CD19+细胞在IL-4和IL-12刺激下出现明显的STAT-6磷酸化。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对部分CD19+细胞有轻微的磷酸化作用,而干扰素-γ(IFN-γ)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)不能诱导STAT6的磷酸化。CD16+细胞在刺激条件下STAT-6磷酸化没有明显变化。


这样的图,正是很多FLOWER梦寐以求的实验结果,只有这样区分出不同群体的磷酸化水平,才能定位到更精细的群体,更好揭示机制。
2021-03-16_13-57-32.jpg
那么怎么才能做到呢?

我们上次在[《流式细胞术做蛋白磷酸化检测的步骤和疑问》](https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8962-1-1.html) 中介绍了磷酸化蛋白的染色,但是只限于磷酸化蛋白的单染,因为甲醇破膜,对表面蛋白影响非常大,因此不适合表面标记和胞内磷酸化蛋白共染。有不少站友希望能够看到共染的Protocol,接着上次这篇Protocol继续。
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发表于 2021-8-6 08:41:30 | 显示全部楼层
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发表于 2021-8-6 08:43:26 | 显示全部楼层
我做胞外蛋白和核内磷酸化共染,总是不成功,如果先染,标记表面marker的抗体就会严重破坏,如果一起染,表面marker就会严重破坏
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发表于 2021-8-12 10:40:19 | 显示全部楼层
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 楼主| 发表于 2021-8-13 16:07:49 | 显示全部楼层
juzixiangshui 发表于 2021-8-12 10:40
倪老师好,1μg/mL微囊藻毒素和1 mM叠氮钠必须加吗

由于未按此Protocol实践,故无法给你明确的答案,但感觉可探索一下不加。
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