找回密码
 加入流式中文网

QQ登录

只需一步,快速开始

查看: 1042|回复: 5

[磁珠分选] 磁珠分选CD4+naive(阴选)/CD8+(阳选)后流式上机圈门

[复制链接]
发表于 2021-3-25 08:59:27 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星已解决
各位老师好,近期实验,新鲜外周血PBMC,用美天旎磁珠CD4+naive(阴选)磁珠和CD8+(阳选)磁珠,有几个问题想请教。
一、我的样本分了两份,分别做的CD4+naive分选(阴性选择)和CD8+分选(阳性选择),我比较了下说明书觉得可以二合一分选,先分选CD8+T细胞(目的细胞在柱子上),流经柱子的悬液再上CD4+阴性选择。想确认一下这样可行嘛?
二、CD4+naive阴选说明书里是用LS,我查了下论坛既往的帖子,也都用LS,如果我的总PBMC量不多,只有1*10^7个,我可以用MS嘛,这样效果是更好还是更差呢?
三、分选后的细胞,我染色了CD45/CD3/CD4/CD8上流式,检测纯度。但是,圈门和纯度的描述我有疑问?我们说CD4或CD8细胞纯度xx%,这个比例是哪个里面的,是占CD45+细胞比例还是CD3+细胞比例呢?
四、结合问题3,请大家指导下我的上机圈门。我的CD4+占CD3+的约80%、CD3+占淋巴细胞约94%。我的CD8+占CD3+约95%、CD3+占淋巴约96%。我的分选结果,CD4纯度有些低,可用嘛?

CD4阴选磁珠分选结果

CD4阴选磁珠分选结果

CD8阳选磁珠分选结果

CD8阳选磁珠分选结果

最佳答案

查看完整内容

1、你这里的液流是好的。 2、你要对比纯度,应该计算CD4+T细胞占所有白细胞的比例。
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2021-3-25 08:59:28 | 显示全部楼层
shunlifasci 发表于 2021-3-28 11:20
老师,我还想问一下,
1、我图中的time门显示的,液流是稳定还是不稳定呢?因为上机过程中有调整速度低俗 ...

1、你这里的液流是好的。
2、你要对比纯度,应该计算CD4+T细胞占所有白细胞的比例。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2021-3-25 09:03:36 | 显示全部楼层
还有一个小问题,我发现流式上机时(实验室是BD流式机器)上样速度,低俗、中速、高速不同,可能导致Time门不是一直连续的、略有区别?但其实我比较了Time圈部分(如我上图)与圈全部,对后续结果几无影响。。我下次不想圈time门了,大家觉得呢?
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2021-3-25 10:40:37 | 显示全部楼层
二合一分选的策略理论上可行的,不过我也是理论派,希望站内有实际操作经历的FLOWER参与讨论吧。

第二个我回答不了。

第三个,可以用占CD3的纯度评估效果,纯度是偏低,可能与阴选的策略本身有关。

最后,顺便说一下Time图,还是建议圈,你这里看到的只是液流稳定的时候,高速低速哪个区域都没问题,但是万一哪天液流出了问题,你不去看,就容易出问题。
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2021-3-25 16:31:45 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-3-25 10:40
二合一分选的策略理论上可行的,不过我也是理论派,希望站内有实际操作经历的FLOWER参与讨论吧。

第二个我 ...

谢谢老师!我的CD4分选确实有问题,应该不可以用于后续实验。Time门可能就像您说的,正常情况下,感觉不出来,要是遇到液流出问题,就有用了。
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2021-3-28 11:20:00 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-3-25 10:40
二合一分选的策略理论上可行的,不过我也是理论派,希望站内有实际操作经历的FLOWER参与讨论吧。

第二个我 ...

老师,我还想问一下,
1、我图中的time门显示的,液流是稳定还是不稳定呢?因为上机过程中有调整速度低俗到中速,所以time门上有个分界线。但我尝试比较在time门中,全部圈门与部分圈门(我图示是部分圈门:81.7%),对后续结果分析基本没影响。我理解是液流是稳定的,只不过上机调整速度后导致time上有分界线。如果确实如此,那我time门圈门的时候,是应该全部圈呢还是就是像我图中圈门那样?
2、我思考了下,我觉得我的圈门方式对验证磁珠分选纯度是错误的,不应该一级级分下去。因为我就是想看分选后细胞群中某细胞(假设CD4)比例,其实就应该在FSC-A/FSC-H之后进行CD4/SSC圈门,算出来CD4+细胞比例,这才是我想要的“纯度”。您说的“可以用占CD3的纯度评估效果”,即便是占CD3的比例100%,但是CD3可能只占CD45或PBMC的一部分,意味着还是有很多其他杂细胞,我获得的细胞群并不是纯的CD4。 您觉得我的理解对嘛,谢谢老师。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则 需要先绑定手机号

手机版|流式中文网 ( 浙ICP备17054466号-2|浙ICP备17054466号-2 )

浙公网安备 33038202004217号

GMT+8, 2024-3-29 13:06

Powered by Discuz! X3.5

© 2001-2024 Discuz! Team.

快速回复 返回顶部 返回列表