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[淋巴细胞相关] 使用PMA刺激小鼠细胞6小时后检测流式,CD44和CD95没有表达?

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 楼主| 发表于 2021-3-30 15:15:45 | 显示全部楼层 |阅读模式
5流星
请教老师们,为什么Ba/b/c1小鼠细胞检测CD44和CD95没有表达?

发表于 2021-3-31 14:14:10 | 显示全部楼层
你的染色步骤?是否经过了固定?
 楼主| 发表于 2021-3-31 16:39:00 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-3-31 14:14
你的染色步骤?是否经过了固定?

倪老师,这个是需要胞内染色的吗?这样可以检出?
 楼主| 发表于 2021-3-31 16:41:27 | 显示全部楼层
缘yuan 发表于 2021-3-31 16:39
倪老师,这个是需要胞内染色的吗?这样可以检出?

我一直做的是表面染色,检不出来
发表于 2021-3-31 18:03:05 | 显示全部楼层
缘yuan 发表于 2021-3-31 16:41
我一直做的是表面染色,检不出来

不是说胞内染色,我是担心你的步骤里面用到了固定剂或者含固定剂的裂解液等,影响结果。
 楼主| 发表于 2021-4-1 09:28:14 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-3-31 18:03
不是说胞内染色,我是担心你的步骤里面用到了固定剂或者含固定剂的裂解液等,影响结果。 ...

没有,我的裂解液没有固定剂的成分;我是先裂解红细胞再标抗体的;
发表于 2021-4-1 12:42:30 | 显示全部楼层
缘yuan 发表于 2021-4-1 09:28
没有,我的裂解液没有固定剂的成分;我是先裂解红细胞再标抗体的;

先标记,再裂红。
发表于 2021-4-1 13:31:34 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-4-1 12:42
先标记,再裂红。

我们都是先裂红,封闭之后表染CD44 可以染上
发表于 2021-4-1 15:59:39 | 显示全部楼层
多纳泰罗豪 发表于 2021-4-1 13:31
我们都是先裂红,封闭之后表染CD44 可以染上

不是说不可以,但在他们标记不上的时候,还是建议按照正常流程做。
正常流程,是应该先标记再裂解的,你可以看各种Protocol。
发表于 2021-4-2 15:51:00 | 显示全部楼层
缘yuan 发表于 2021-4-1 09:28
没有,我的裂解液没有固定剂的成分;我是先裂解红细胞再标抗体的;

有些溶血素是带有固定剂的,例如临床常用的BD FACS Lysing solution  (349202)
,先裂红再标记就标不上了。
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