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[细胞增殖] 体外培养刺激CFSE标记的PBMC,流式图如何圈门?

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 楼主| 发表于 2021-4-6 00:32:11 | 显示全部楼层 |阅读模式
2流星
本帖最后由 shunlifasci 于 2021-4-6 00:40 编辑

各位老师好,前一阵子在做PBMC刺激培养、用CFSE标记检测细胞增殖。刺激条件:anti-CD3/CD28培养PBMC,5d后上流式,上机染色抗体CD45/CD3/CD8。
我的实验是想看不同浓度药物对T细胞增殖是否有影响?

有一个样本,如下,我圈红的就是不知道应该如何画门,有两种圈门方式,见附图1和附图2中,其中CD45/SSC这个级图,不知道应该画哪一个,从下级图(CD45/CD3)看似乎都可以,但是对我后续CFSE结果影响甚大。所以请教老师,这两种圈门方式,哪个是准确的?我之所以不确定,就是因为这两种圈门方式的下一级图,即CD45+CD3+图,看上去两个好像都对,但再往下的CFSE分析相差甚远!!!我懵逼了!

我发现,对于刺激后的细胞,圈门总是存在问题,困惑!

第一种圈门方式(第二级图,红圈表示)

第一种圈门方式(第二级图,红圈表示)

第二种圈门方式(第二级图,红框表示)

第二种圈门方式(第二级图,红框表示)
 楼主| 发表于 2021-4-6 00:38:15 | 显示全部楼层
另外,CFSE图形展示,我是自己自认为那么画图。说实话,我都不知道我画的CFSE对不对。比如选中CF45+CD3+门,点进进去后,直接把横坐标改成CFSE纵坐标改成histgram,我理解这就代表CD3+细胞的增殖结果图。这样对嘛?(好捉急啊,没人教,自己找的资料也没讲清)
还有,我这个图,是不是CD8补偿没调好,我还不会调补偿,太难了QAQ
发表于 2021-4-6 07:40:49 | 显示全部楼层
shunlifasci 发表于 2021-4-6 00:38
另外,CFSE图形展示,我是自己自认为那么画图。说实话,我都不知道我画的CFSE对不对。比如选中CF45+CD3+门, ...

FCS文件传上来看看。感觉补偿没调到位,然后设门也是存在问题的。
 楼主| 发表于 2021-4-6 09:12:54 | 显示全部楼层
谢谢老师。请您帮忙看一下,感谢。
原始文件(好像不能直接上传FCS文件,我压缩了一下)

正常刺激组.fcs.zip

2.92 MB, 下载次数: 3

药物2.zip

3.44 MB, 下载次数: 1

药物1.fcs.zip

4.31 MB, 下载次数: 3

 楼主| 发表于 2021-4-6 09:13:41 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-4-6 07:40
FCS文件传上来看看。感觉补偿没调到位,然后设门也是存在问题的。

补偿也有问题啊,设门也有问题,那我还分析个啥,暂时先不分析了,等这些问题解决吧
 楼主| 发表于 2021-4-7 10:01:53 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-4-6 07:40
FCS文件传上来看看。感觉补偿没调到位,然后设门也是存在问题的。

老师,请您帮忙看一下呢,已上传FCS文件,谢谢
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