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[凋亡检测] fitc单染有问题吗?该怎么画十字门?压边多的图能用吗?

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 楼主| 发表于 2021-4-9 09:46:47 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
本帖最后由 danny1982 于 2021-4-9 09:57 编辑


                               
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流式新手请教,问题太多了。如图,分别是pi单染,fitc单染,control,和三个给药的图。感觉fitc单染不是应该在Q3吗,几乎都往右上冲,不知道是不是有问题呢,而且这个门不知道该怎么画了。还有正常组显示有37%的压边,调了补偿也没什么改善,压边这么多的图能用吗。自己根据细胞分群画了个门,但Q3显示有8.18%早调,看图明显没那么多啊。还请老师们指教。

截屏2021-04-09 上午9.33.04.png

control 37%压边

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发表于 2021-4-9 13:28:13 | 显示全部楼层
压轴的信号是可以调出来的,坐标轴选择Logicle转换。

但是补偿是个关键的问题,哪几个是单染的,你得把补偿调大,使其单阳性,一般都调得下来,实在调不下来,只能根据单染的斜向设多边形门。
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发表于 2021-4-15 17:00:51 | 显示全部楼层
同样有这个疑问,FITC单染向右上冲,怎么调补偿都调不下来,和楼主的图特别像,这是什么原因?染料的问题?还是什么原因
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发表于 2021-4-17 09:18:48 | 显示全部楼层
zhji1231150260 发表于 2021-4-15 17:00
同样有这个疑问,FITC单染向右上冲,怎么调补偿都调不下来,和楼主的图特别像,这是什么原因?染料的问题? ...

1、抗体滴度。
2、电压。
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发表于 2021-4-22 18:15:20 | 显示全部楼层
细胞凋亡的上机一般步骤是这样的:
1. 上空白对照管(没有进行任何染色);调整FSC和SSC电压,使细胞和细胞碎片可以明显分开,并且没有压线细胞;调整FITC、PE以及PerCP通道(或者PerCP-Cy5.5)电压,使完整细胞在这些轴上对应位置均在1000以下。
2. 上FITC单阳对照管(只染色FITC),调整FITC电压,使FITC通道没有压线细胞,并且FITC通道上阴性和阳性明显分开;调整PE对FITC补偿、PerCP对FITC通道补偿,使阴阳两群细胞在PE及PerCP通道的平均荧光强度接近,如果补偿特别大,尝试降低PE及PerCP通道电压,再调补偿,直到达到横平竖直的效果。
3. 上PI单阳管,验证PE或者PerCP通道电压是否合适(在这两个通道有两群分群明显的细胞即为合适)如果不合适,重复第二步。之所以选择PerCP通道是因为PI的荧光光谱很宽,PerCP通道也可以检测到荧光信号,且最终分析结果与PE通道结果无差异。并且在诸如C6 Plus等不能调整电压的流式细胞仪上,更容易通过调整补偿得到好看的图片。

PI荧光与PE及PerCP通道对应滤光片如图所示,图片中585/42是常用的PE通道。
图片1.png

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组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2021-4-26 10:35:06 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-4-17 09:18
1、抗体滴度。
2、电压。

倪老师,是不是可以降低PE通道的电压,或者降低一下抗体的浓度
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发表于 2021-4-26 11:04:17 | 显示全部楼层
zhji1231150260 发表于 2021-4-26 10:35
倪老师,是不是可以降低PE通道的电压,或者降低一下抗体的浓度

不是说不可以。但是不能乱调。
电压,一般是根据校准微球确定,最后实际样本,尽量不调,必要时进行微调。
抗体用量,需通过滴定确定。
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