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[结构和原理] 流式实验每次都要做同型对照和FMO对照吗

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 楼主| 发表于 2021-4-19 10:54:02 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星

组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2021-4-19 11:14:58 | 显示全部楼层
    我也刚开始做流式,谈论一下我的理解吧。同型应该是有必要的,原理什么的都能查到就不说了。之前问技术,技术告诉我说,同型对照在上机的时候就是调节电压,电压感觉还挺重要的,我做了几次都没调好,样品的结果都飘出去了。FMO对照主要是看你做几个颜色吧,两个以上,且有重叠应该是要做的。
     以上是我的理解,表达的可能有些不规范,或者错误。希望老师指正。
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发表于 2021-4-19 17:03:33 | 显示全部楼层
看你的具体实验方案,实验目的,以前是都加,做得多了不是每次都加
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发表于 2021-4-19 18:02:49 | 显示全部楼层
Yooooo 发表于 2021-4-19 11:14
我也刚开始做流式,谈论一下我的理解吧。同型应该是有必要的,原理什么的都能查到就不说了。之前问技术 ...

同型其实可以搜一下站内以前发过的资料,不是用于调节电压。
调节电压,应该是空白对照。
同型对照,如果是真正的isotype,用做设门参照没问题,但关键是绝大多数情况下,大家无法找到正确的isotype,因此其设门意义渐渐被淡化。
随着多色流式的盛行,荧光渗漏成为背景信号最重要的来源,因此FMO渐渐被重视,所以每一批实验,尽量做一次FMO,同时事先进行Fc阻断。
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2021-4-21 15:32:44 | 显示全部楼层
Yooooo 发表于 2021-4-19 11:14
我也刚开始做流式,谈论一下我的理解吧。同型应该是有必要的,原理什么的都能查到就不说了。之前问技术 ...

我现在做3色,想看下3种细胞的比例,但是总的细胞数量不是很多,之前做了一次只做了一个阴性对照,想着是不是做下其他对照设门比较准确,还想问下同型和FMO对照的话最少的细胞量是多少,还有抗体的用量大概是多少,刚开始做没啥经验,希望您分享下经验
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发表于 2021-4-21 20:32:29 | 显示全部楼层
xyf许燕芬 发表于 2021-4-21 15:32
我现在做3色,想看下3种细胞的比例,但是总的细胞数量不是很多,之前做了一次只做了一个阴性对照,想着是 ...

同型对照和FMO细胞量和实验组一样。抗体用量,尽量通过抗体滴定(可站内搜索这个关键词找步骤)确定。
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发表于 2021-4-22 08:50:10 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-4-19 18:02
同型其实可以搜一下站内以前发过的资料,不是用于调节电压。
调节电压,应该是空白对照。
同型对照,如果 ...

我当时询问技术,技术说同型也就相当于阴性对照了,然后,做了同型就没必要再做空白了。感谢老师制作,我再学习一下。
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发表于 2021-4-28 16:49:34 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-4-21 20:32
同型对照和FMO细胞量和实验组一样。抗体用量,尽量通过抗体滴定(可站内搜索这个关键词找步骤)确定。 ...

倪老师你好,刚到一个新公司。这边有关于抗体标记的百分比的算法是 正常染色的百分比-iso的百分比。 想问一下这样的计算方式合理么?
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发表于 2021-4-28 17:56:44 | 显示全部楼层
无知的牧羊人 发表于 2021-4-28 16:49
倪老师你好,刚到一个新公司。这边有关于抗体标记的百分比的算法是 正常染色的百分比-iso的百分比。 想问 ...

这个算法是ELISA的算法。如果你们公司认定了这样,那就合理。但在流式上一般都不这样子。
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发表于 2021-4-29 08:27:27 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-4-28 17:56
这个算法是ELISA的算法。如果你们公司认定了这样,那就合理。但在流式上一般都不这样子。 ...

好的。那一般来说 是 iso在合理范围内,就可以直接读数据就行了吧
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