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[标本处理] 为什么刚消化下来的人胚胎干细胞上流式没有明显细胞群

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 楼主| 发表于 2021-4-23 16:37:36 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
大家好,请教个基本问题,最近做的人胚胎干细胞的流式实验遇到了个问题,刚刚消化下来的细胞1X10的5次方用来上流式,另一部分传代了。
问题:1、上流式的时候WT没有明显细胞群,碎片和死细胞占98%以上,转染了质粒后的有细胞群,但是只有10~20%,不知是什么原因?(注:传代的细胞状态很好,消化细胞的酶换了一个,结果一样没有细胞群,去年做过一次通透后染色,并没有出现这个问题)上传2张图片,请大家帮忙分析分析,多谢!

图1是去年2020年做的流式,细胞通透后染色流式分析,细胞群很明显。

图1是去年2020年做的流式,细胞通透后染色流式分析,细胞群很明显。

注:图1是去年2020年做的流式,细胞通透后染色流式分析,细胞群很明显。


图2 是近期4月22号的流式,细胞转染了质粒,细胞是一样的,消化用的酶(新买的)和去年也是一样的,流式电 ...

图2 是近期4月22号的流式,细胞转染了质粒,细胞是一样的,消化用的酶(新买的)和去年也是一样的,流式电  ...

注:图2 是近期4月22号的流式,细胞转染了质粒,细胞是一样的,消化用的酶(新买的)和去年也是一样的,流式电压也是一样的,也重新调了一下其他电压也没找到任何细胞群,后来消化用的酶做了稀释后再消化结果也是 一样

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发表于 2021-4-24 21:21:56 | 显示全部楼层
先确认仪器状态是否正常。优选质控微球确认,其次正常样本。
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 楼主| 发表于 2021-4-25 10:39:08 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-4-24 21:21
先确认仪器状态是否正常。优选质控微球确认,其次正常样本。

倪老师,仪器应该是没有问题的,因为跑完这个细胞之后,又跑了一个人的原代细胞的实验就没有问题,细胞群很明显,而且结果也很好,所以怀疑是胚胎干细胞哪出了问题
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发表于 2021-4-25 16:06:10 | 显示全部楼层
果儿 发表于 2021-4-25 10:39
倪老师,仪器应该是没有问题的,因为跑完这个细胞之后,又跑了一个人的原代细胞的实验就没有问题,细胞群 ...

如确定仪器没问题,是只能在样本上找原因了。
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