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用这个克隆号的CD3做胞内染色,能区分sCD3-T和NK淋巴瘤

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 楼主| 发表于 2021-4-27 16:00:57 | 显示全部楼层 |阅读模式

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尽管T细胞和NK细胞是由共同淋巴祖细胞产生,但它们有许多差异。正常的T细胞在胸腺中发育,表达表面CD3(sCD3),是CD2+ CD5+ CD7+ CD16-/+ CD56-/+,并显示出重排的T细胞受体(TCR)基因。相比之下,正常的NK细胞在骨髓中发育,缺乏sCD3表达,CD2+ CD5- CD7+ CD16+ CD56+。NK细胞相关标记,包括CD16,CD56,CD57,CD94/NKG2和杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR),已被用于鉴定NK细胞肿瘤。但是,这些与NK细胞相关的标志物也可以在正常的反应性T细胞和某些T细胞肿瘤中表达,例如T细胞大颗粒性淋巴细胞白血病和肝脾T细胞淋巴瘤。当肿瘤性T细胞失去sCD3表达或肿瘤性NK细胞获得CD5表达时,将T细胞与NK细胞肿瘤区分开可能会更加困难。对于没有其他辅助测试或临床信息可参考的流式细胞术实验室,这可能尤其成问题。因此,迫切需要可靠,简单,快速的流式细胞术来区分T细胞和NK细胞肿瘤。

CD3是T细胞谱系定义标记,它是免疫球蛋白超家族的成员,由CD3ε、δ、γ和ζ链组成。 4条胞质CD3(cCD3)链与TCR非共价结合,在正常T细胞的细胞表面上形成CD3/TCR复合物,但在其他细胞类型中则没有这种结构。这种表面CD3/TCR复合物对于正常的T细胞发育、分化和激活至关重要。**在T细胞的细胞质内,在组装CD3/TCR复合物之前会形成2个异二聚体(CD3ε/γ和CD3ε/δ)。尽管成熟的NK细胞具有cCD3,但它们只包含CD3ζ或CD3ε单链**,在成熟的NK细胞中未检测到CD3ε/γ和CD3ε/δ异二聚体。单克隆CD3抗体克隆SK7/Leu-4是流式细胞术中广泛使用的抗体,该抗体的一个经常被遗忘的特征是它能特异性结合T细胞中的cCD3ε/γ和/或CD3ε/δ异二聚体,但不结合NK细胞中的游离CD3ε。

这里,我们来看一下SK7/Leu-4克隆号的CD3,做胞内染色,区分sCD3-T细胞肿瘤和NK细胞肿瘤的效果。

这是19例sCD3- T-NHL的表型特征,均为sCD3-而cCD3+(SK7/Leu-4克隆号):
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下面看其中几个病例的图,A图是外周T细胞淋巴瘤(NOS)患者的流式细胞仪免疫表型,即表中第15个病例,肿瘤细胞(红色)为sCD3–CD4–CD8–CD2+ CD7+,强表达cCD3。 TCRβF1的免疫组织化学研究为阳性(数据未显示)。同时显示了正常CD4 + T细胞(紫色)和正常的CD8 + T细胞(棕色)。 B图是另一例外周T细胞淋巴瘤(NOS),肿瘤细胞(红色)的免疫表型(表中第18号病例)类似于NK细胞的免疫表型,因为sCD3–CD4–CD5– CD2+ CD7+ CD8+。但是,肿瘤细胞cCD3阳性。克隆性T细胞受体基因重排证实了T细胞谱系(数据未显示)。
2021-04-27_15-36-28.jpg


上面两个相对好一点,C图是一名肝脾T细胞淋巴瘤患者(表中病例19)显示,由于CD2+ sCD3-CD4-CD5-CD7(dim)CD8(dim)CD16partial CD56+ CD94+,并且有多个KIR限制性表达,假如到此为止,可能很多人会判为NK细胞。但肿瘤细胞均对cCD3呈阳性。通过TCRβF1表达通过免疫组织化学进一步证实了T细胞谱系(数据未显示)。
2021-04-27_15-36-34.jpg


那么在NK肿瘤中表现如何呢?
下表是13例NK细胞肿瘤表型结果:
2021-04-27_15-39-45.jpg

其中的例5和例10,图形如下,依次对应图D和图E,两者均CD2+sCD3–CD7+CD16+CD56+,但例5(D图)CD5-CD8-,例10(E图)CD5partial CD8+:
2021-04-27_15-41-37.jpg


尽管特异性相当之高,但还是可以看到这13例NK细胞肿瘤中,有2例患者存在胞浆CD3部分表达。

以第12例慢性NK细胞增殖性疾病为例,肿瘤细胞(蓝色)显示典型的NK细胞表面抗原表达:CD2+sCD3-CD5-CD7+CD16+CD56+CD57+,CD158e限制性。然而,却部分表达cCD3(A图),细胞谱系无法明确。B图为分选CD16+CD56+cCD3+细胞和CD16+CD56+cCD3-细胞进行TCR基因重排研究,
以血液DNA为阳性对照(右),可见左侧两个细胞亚群都没有TCR重排产物(左),因此不支持T细胞谱系,而应判为NK细胞。
2021-04-27_15-51-04.jpg

由此可见,SK7/Leu-4克隆号的CD3抗体做胞内染色,可以解决绝大部分sCD3-T细胞淋巴瘤和NK淋巴瘤的鉴别,甚好!


参考文献:Shi, Min et al. “Cytoplasmic Expression of CD3ε Heterodimers by Flow Cytometry Rapidly Distinguishes Between Mature T-Cell and Natural Killer-Cell Neoplasms.” American journal of clinical pathology vol. 154,5 (2020): 683-691. doi:10.1093/ajcp/aqaa086

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