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[淋巴细胞相关] 小鼠肿瘤Treg细胞流式染色

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 楼主| 发表于 2021-6-18 18:06:02 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
请教下各位老师和同学,我想用流式检测下小鼠肿瘤中Treg细胞,买了ebioscience的固定破膜试剂盒,抗体使用的是CD4-FITC CD25-APC FOXP3-PECY5.5,第一次做Treg,不知道为啥好像没做出来,后面的也不分群
固定破膜在上机时候,感觉明显淋巴细胞那一群在散点图上都看不出来了,同样的样品,我还做了CD3 CD4 CD8和巨噬细胞的染色,这些样品中淋巴细胞的分群还是比较明显,整个染色过程洗的次数比较多,好像确实把细胞洗走了一部分。图上就是同一个肿瘤取的样品,直接染色巨噬细胞的和固定破膜染色Treg的,形状确实变了
想请教下大家这种情况我下次做的时候该怎么改进?请大家提提建议和意见,谢谢大家!
我目前想的一些方法:1.使用淋巴细胞分离液先把肿瘤部位的淋巴细胞提取出来;2.加大未染色时细胞的用量;3. CD3也染上;4. 下次做的时候染个小鼠的脾试试操作方法和技术上有没有什么问题

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发表于 2021-6-18 21:36:27 | 显示全部楼层
如果第一次做核内标记,我的建议是先用小鼠血样做,这样相对容易些,这个时候看做出来的图形是否好,如果图形好,那么再做组织的,那时候就能知道是组织解离的问题,还是破膜的问题。
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 楼主| 发表于 2021-6-18 21:41:20 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-6-18 21:36
如果第一次做核内标记,我的建议是先用小鼠血样做,这样相对容易些,这个时候看做出来的图形是否好,如果图 ...

我目前还从没做过血样的,我先大概了解下,可以先做脾的试试吗
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发表于 2021-6-19 19:14:47 | 显示全部楼层
zxy714142006 发表于 2021-6-18 21:41
我目前还从没做过血样的,我先大概了解下,可以先做脾的试试吗

血样好做,所以作为摸索操作手法、条件,容易找出问题,是最合适的。
如果直接做脾脏,影响因素太多,所以一旦染不出,很难确定问题所在。
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发表于 2021-6-28 14:18:23 | 显示全部楼层
老师您好,我做的Treg出来也是分群和其他细胞不太一样,请问您解决了吗
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发表于 2021-6-28 16:00:10 | 显示全部楼层
鲁晶晶 发表于 2021-6-28 14:18
老师您好,我做的Treg出来也是分群和其他细胞不太一样,请问您解决了吗

帖子提到的试剂盒,相对来说还是比较靠谱的,所以原因基本上都在处理的细节上,建议先拿比较容易做的样本上手,等操作细节完善、结果稳定了,再做组织这种高难度的。
小鼠的血太少,可取日常检验科剩余的血做人Treg先。
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发表于 2021-9-5 13:41:37 | 显示全部楼层
请问楼主问题解决了吗?最近也想做肿瘤组织Treg
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发表于 2021-9-6 11:37:15 | 显示全部楼层
对于组织肿瘤样本的检测,建议加入CD45帮助圈出白细胞,在肿瘤组织中白细胞含量,没有圈门抗体不容易区分。
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发表于 2021-9-7 19:26:40 | 显示全部楼层
前几天拿肿瘤组织制备单细胞悬液,单染管上机都看不到阳性细胞,我们组开始考虑先磁珠分选对CD45细胞提纯再染色上机
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