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[结构和原理] 胞内染色固定和破膜,是不是会使GFP失效?

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 楼主| 发表于 2021-6-21 13:22:18 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
请问如何通过胞内染色去流式检测到GFP?

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发表于 2021-6-21 15:00:19 | 显示全部楼层
乙醇固定肯定不行。
多聚甲醛,固定有技巧,可以优化,见文献(https://www.future-science.com/doi/pdf/10.2144/000113780),里面提到,0.5%固定半小时以上,或1%固定15分钟以上,可保留YFP的荧光,所以对于GFP,也是类似。稳妥起见,我建议你可以用1%固定30分钟以上。
2021-06-21_14-58-57.jpg
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2021-6-21 16:02:34 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-6-21 15:00
乙醇固定肯定不行。
多聚甲醛,固定有技巧,可以优化,见文献(https://www.future-science.com/doi/pdf/10 ...

倪老师,你好,问下胞内染色中固定及破膜对细胞的CFSE是否会失效
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发表于 2021-6-22 08:01:21 | 显示全部楼层
飞翔 发表于 2021-6-21 16:02
倪老师,你好,问下胞内染色中固定及破膜对细胞的CFSE是否会失效

这方面问题暂时未看到。你碰到了?
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2021-6-22 10:25:00 | 显示全部楼层
飞翔 发表于 2021-6-21 16:02
倪老师,你好,问下胞内染色中固定及破膜对细胞的CFSE是否会失效

看了BD CFSE说明书,不会失效哦。看下图以及说明书 CFSE IL-2.png [url=]565082 BD CFSE.pdf[/url]

565082 BD CFSE.pdf

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你知道活性/增殖/凋亡/焦亡/自噬的区别吗?——点击了解细胞健康检测全面方案
发表于 2021-6-22 12:44:55 | 显示全部楼层
sunny2829 发表于 2021-6-22 10:25
看了BD CFSE说明书,不会失效哦。看下图以及说明书565082 BD CFSE.pdf

组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2021-7-21 09:45:07 | 显示全部楼层
打扰!我昨天做了转染细胞后的Ki67破膜染色,发现eGFP荧光完全丢失,用的是赛默飞的破膜液,不懂是不是会有影响
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发表于 2021-7-21 17:19:09 | 显示全部楼层
刘小六 发表于 2021-7-21 09:45
打扰!我昨天做了转染细胞后的Ki67破膜染色,发现eGFP荧光完全丢失,用的是赛默飞的破膜液,不懂是不是会有 ...

建议参考2楼的固定方法,然后再用Thermo的破膜剂。
你知道活性/增殖/凋亡/焦亡/自噬的区别吗?——点击了解细胞健康检测全面方案
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