小鼠外周血淋巴细胞亚群问题

侯月

各位老师好，我想咨询一下有关小鼠外周血流式的问题。
我的实验操作如下：小鼠眼球取血，150ul全血+1ml索莱宝裂红液，4℃ 15min，1650rpm 5min条件下离心，弃上清，再加1ml索莱宝裂红液，4℃ 15min，1650rpm 5min条件下离心，弃上清，然后1mlPBS重悬细胞，上机检测。

这个protocal是我一个做成了的朋友给我的，人家这么做从来都没有问题。
但是我前前后后做了很多次，也换了不同条件不同裂红液品牌，可是细胞群一直是这样的，而且左下角细胞实在太多了，能达到90%，无论我怎么调整实验条件，左下角细胞数永远这么多，我的目的细胞每次只占5%左右。

我也不知道到底是哪里出了问题，所以希望有懂的老师提点一下我，谢谢！

侯月

PBS用的都是成品PBS，上流式我都不敢用自己配的PBS
裂红液用了索莱宝、geneview、还有隔壁实验室师姐自己配的裂红液，都是这样的。
我在取血的时候眼球取血，让血直接滴入紫色采血管中，不刮也不蹭的。

niwanmao

侯月 发表于 2021-6-28 18:11
PBS用的都是成品PBS，上流式我都不敢用自己配的PBS
裂红液用了索莱宝、geneview、还有隔壁实验室师姐自 ...

提高FSC的阈值即可。这不是裂解有问题 ，而是获取的FSC阈值未设置好。

飞翔

侯月 发表于 2021-6-28 18:11
PBS用的都是成品PBS，上流式我都不敢用自己配的PBS
裂红液用了索莱宝、geneview、还有隔壁实验室师姐自 ...

像倪老师说的一样，提高FCS的阈值可以的，
裂解的话，小鼠的红细胞比较多，一般的30倍以上裂红效果会好很多

侯月

niwanmao 发表于 2021-6-28 21:02
提高FSC的阈值即可。这不是裂解有问题 ，而是获取的FSC阈值未设置好。

谢谢老师。我照你说的做了，果然变好了。

侯月

飞翔 发表于 2021-6-28 21:17
像倪老师说的一样，提高FCS的阈值可以的，
裂解的话，小鼠的红细胞比较多，一般的30倍以上裂红效果会好很 ...

谢谢老师！我调整了FSC阈值，现在成功了

风萧易水

请问你的收集血液的紫色管子在哪里买的？我最近也在做这个实验，我的FSC的阈值也调的很低，导致细胞不能调到中间。

niwanmao

风萧易水 发表于 2021-7-1 22:19
请问你的收集血液的紫色管子在哪里买的？我最近也在做这个实验，我的FSC的阈值也调的很低，导致细胞不能调 ...

紫头管是EDTA抗凝管，检验采血常规用的，很多生产管子的厂家都有。

风萧易水

niwanmao 发表于 2021-7-2 10:10
紫头管是EDTA抗凝管，检验采血常规用的，很多生产管子的厂家都有。

谢谢倪老师！

侯月

风萧易水 发表于 2021-7-1 22:19
请问你的收集血液的紫色管子在哪里买的？我最近也在做这个实验，我的FSC的阈值也调的很低，导致细胞不能调 ...

很好买，就医院那种紫色采血管，很多试剂商都卖，不到100块钱，100个。而且如果血少的话可以要2ml规格的。