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[淋巴细胞相关] 流式后跑WB

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 楼主| 发表于 2021-7-12 14:55:24 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
做Treg,分化后的Treg进行FOXP3的染色,如果希望用上流式之后剩下的细胞来跑WB的一些信号通路,已经破核的细胞是否可以呢?

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发表于 2021-7-12 22:13:43 | 显示全部楼层
建议如果要做信号通路,还不如直接用流式染相关的信号通路蛋白,可直接得出单细胞水平的数据。
Western是群体平均的数据,与流式数据无法关联起来。
参考磷酸化蛋白流式专帖:https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-9222-1-1.html
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 楼主| 发表于 2021-9-9 15:21:17 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-7-12 22:13
建议如果要做信号通路,还不如直接用流式染相关的信号通路蛋白,可直接得出单细胞水平的数据。
Western是群 ...

倪老师,有个问题还想咨询一下,我想看treg的磷酸化,因为我看文献里面磷酸化会有未刺激组,我前期是加了不同的东西去看它对于treg分化的影响的,我的未刺激组应该怎么设置,老师说她以前做磷酸化是细胞分选之后静置然后加刺激的,但是没做过分化后的,我是应该分化结束之后先把细胞静置一段时间再用CD3/CD28去激活同时设置不激活的未刺激组还是直接染就可以,我应该不能一开始设置未刺激组养几天吧,因为那样就没有treg分化出来了
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发表于 2021-9-9 21:03:29 | 显示全部楼层
zjcxchentian 发表于 2021-9-9 15:21
倪老师,有个问题还想咨询一下,我想看treg的磷酸化,因为我看文献里面磷酸化会有未刺激组,我前期是加了 ...

可用FMO对照啊。磷酸化抗体那个通道留空。
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 楼主| 发表于 7 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-9-9 21:03
可用FMO对照啊。磷酸化抗体那个通道留空。

用FMO作为未刺激组?
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