信号传导要测的磷酸化蛋白，为什么不用流式来做呢？

niwanmao

@zjcxchentian 站友在论坛内提问道：

做Treg，分化后的Treg进行FOXP3的染色，如果希望用上流式之后剩下的细胞来跑WB的一些信号通路，已经破核的细胞是否可以呢？

从问题来看，大家还是习惯性用WB测信号通路蛋白的表达水平。其实我们目前已经认识到，细胞信号通路最关键的步骤就是蛋白磷酸化过程：在蛋白质的某些氨基酸上增加一个磷酸基团，以转达来自细胞外环境的信号。磷酸化涉及某些蛋白质的激活或失活。在我们身体使用的20种氨基酸中，有三种氨基酸可以被磷酸化，用于信号转导途径。丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸都有一个羟基（OH-）侧基，均可磷酸化。所以，信号传导约等于磷酸化蛋白的检测。

有许多检测蛋白质磷酸化的方法，这些方法都使用单克隆抗体来检测磷酸化蛋白。不同的方法有不同程度的分辨率和效率。例如，你可以进行Western Blot分析来区分磷酸化和未磷酸化的蛋白质，就需要跑两块独立的板子：一块检测蛋白质的总量，第二块只检测蛋白质的活化，或磷酸化形式。这样就需要很多的样本，此外，常常需要在做Western blot之前，先进行共免疫沉淀以富集细胞群。Western blot的另一个缺点是不能告诉你细胞信号传导通路的改变，究竟发生在哪个特定细胞群中，除非你得到了100%纯的细胞群。

因此，强烈建议大家将流式检测磷酸化蛋白纳入自己的科研工作中，从单细胞水平，更好地去认识细胞信号传导的细胞群体和改变程度。

流式中文网既往整理过不少Protocol，也有一些站友分享的经验，在此整理分享给大家：
- 流式细胞术检测单细胞磷酸化蛋白水平（https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2621-1-1.html）
- 做磷酸化蛋白检测，为什么一加入甲醇就成絮状呢？大家常犯的错误（https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-7866-1-1.html
- 做磷酸化蛋白流式，其实很容易，但需注意条件探索(https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8418-1-1.html)
- 流式细胞术做蛋白磷酸化检测的步骤和疑问(https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8962-1-1.html)
- 表面标记和胞内磷酸化蛋白都要做，如何做的好？(https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8972-1-1.html)
- 磷酸化蛋白流式经验分享(https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8696-1-1.html)

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