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[细胞因子检测] 小鼠淋巴结刺激后CD4不分群

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 楼主| 发表于 2021-7-13 23:28:42 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
小鼠的淋巴结用PMA+icon(就是Thermo三合一的刺激激剂)刺激培养4-6h后检测胞内因子,发现刺激后的CD4不分群,不知道是什么原因,同时做的还有脾脏,但是脾脏的CD4分群了,有大佬可以帮忙解答一下吗?不胜感激。

截屏2021-07-13 下午11.25.02.png
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发表于 2021-7-14 07:45:33 | 显示全部楼层
这个问题,之前站内发过不少帖子,刺激之后CD4内吞,引起CD4下调。

所以解决方法:
1、固定、破膜后,再染CD4。
2、用CD3+CD8-圈门替代CD4。
此外,其它的注意点或优化点,可参见:
PMA/离子霉素刺激检测Th1和Th17,含CD4下调机制和解决办法
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-6801-1-1.html
(出处: 流式中文网)
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 楼主| 发表于 2021-7-14 22:52:59 | 显示全部楼层
谢谢老师,那为什么脾脏的CD4没有出现内吞的现象,而淋巴结会存在呢?
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发表于 2021-7-15 08:09:59 | 显示全部楼层
liuj396 发表于 2021-7-14 22:52
谢谢老师,那为什么脾脏的CD4没有出现内吞的现象,而淋巴结会存在呢?

也有,你可以比对新鲜样本和刺激后样本的CD4强度。
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 楼主| 发表于 2021-7-15 09:41:01 | 显示全部楼层
谢谢老师,还有个问题,我染的小鼠Tfh细胞,用CXCR5和PD-1来标记,发现CXCR5单染的时候能分得很开,但是样品管的CXCR5也是没分群的,也很纳闷。
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发表于 2021-7-15 13:44:09 | 显示全部楼层
liuj396 发表于 2021-7-15 09:41
谢谢老师,还有个问题,我染的小鼠Tfh细胞,用CXCR5和PD-1来标记,发现CXCR5单染的时候能分得很开,但是样 ...

单染的时候,分的开是真的Tfh还是假阳性?
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