小鼠淋巴结刺激后CD4不分群

liuj396 · 发表于 2021-7-13 23:28:42

小鼠的淋巴结用PMA+icon（就是Thermo三合一的刺激激剂）刺激培养4-6h后检测胞内因子，发现刺激后的CD4不分群，不知道是什么原因

，同时做的还有脾脏，但是脾脏的CD4分群了，有大佬可以帮忙解答一下吗？不胜感激。

niwanmao · 发表于 2021-7-14 07:45:33

这个问题，之前站内发过不少帖子，刺激之后CD4内吞，引起CD4下调。

所以解决方法：
1、固定、破膜后，再染CD4。
2、用CD3+CD8-圈门替代CD4。
此外，其它的注意点或优化点，可参见：
PMA/离子霉素刺激检测Th1和Th17，含CD4下调机制和解决办法
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-6801-1-1.html
(出处: 流式中文网)

liuj396 · 发表于 2021-7-14 22:52:59

谢谢老师，那为什么脾脏的CD4没有出现内吞的现象，而淋巴结会存在呢？

niwanmao · 发表于 2021-7-15 08:09:59

liuj396 发表于 2021-7-14 22:52
谢谢老师，那为什么脾脏的CD4没有出现内吞的现象，而淋巴结会存在呢？

也有，你可以比对新鲜样本和刺激后样本的CD4强度。

liuj396 · 发表于 2021-7-15 09:41:01

谢谢老师，还有个问题，我染的小鼠Tfh细胞，用CXCR5和PD-1来标记，发现CXCR5单染的时候能分得很开，但是样品管的CXCR5也是没分群的，也很纳闷。

niwanmao · 发表于 2021-7-15 13:44:09

liuj396 发表于 2021-7-15 09:41
谢谢老师，还有个问题，我染的小鼠Tfh细胞，用CXCR5和PD-1来标记，发现CXCR5单染的时候能分得很开，但是样 ...

单染的时候，分的开是真的Tfh还是假阳性？

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