JC-1线粒体膜电位检测

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请教老师帮我分析一下，我的阳性对照cccp处理之后细胞是发生了向左下偏移，红绿荧光和加了JC-1的对照组相比都发生了下降是什么原因。加药处理组也是发生了左下偏移，这样红绿荧光比值就感觉没变化，可以帮我分析一下原因吗？我看老师以前的帖子说可以看LR的比例，我的阳性对照LR是上升了，但是没有细胞分群还可以看LR比例吗?
1是未加JC-1阴性对照，2是药物处理组，3是加 JC-1的阴性对照，4是CCCP处理3小时

niwanmao

图片未标识是几号标本，所以暂时看不出哪个阳性，也不知道你是否调了补偿。

但无论哪个样本，都没有看到明显的趋势，另外你的实验具体细节也没说（如什么细胞？操作时是加了多少量的JC-1）

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niwanmao 发表于 2021-7-25 09:29
图片未标识是几号标本，所以暂时看不出哪个阳性，也不知道你是否调了补偿。

但无论哪个样本，都没有看到明 ...

倪老师，很抱歉，我重新发了一下图片标记，样本为原代星形胶质细胞，20uM的CCCP处理3小时，按照碧云天JC-1试剂盒1mlJC-1缓冲液加入5ul 200(X)JC-1.孵育20min,消化离心收集细胞，PBS洗2遍，JC-1缓冲液重悬上机。我按照老师你以前发的补偿调节FL1-7%FL2 FL2-70%FL1  请老师帮我分析一下原因，会不会是电压没调好，或是CCCP浓度过高，碧云天JC-1试剂盒推荐的10uM  20min， 感觉没什么变化才加大剂量和延长时间的，请老师帮我分析一下。

niwanmao

17355475436 发表于 2021-7-25 13:13
倪老师，很抱歉，我重新发了一下图片标记，样本为原代星形胶质细胞，20uM的CCCP处理3小时，按照碧云天JC- ...

一般是要关注下图这块红圈内的区域的。但是看起来，无论是FSC和SSC的变化还是JC-1的结果，感觉CCCP管的结果都不正常，可能你需要从实验步骤上找一下原因先。

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好的，谢谢倪老师，我后面实验会改进的看看的

tiger

17355475436 发表于 2021-7-25 15:49
好的，谢谢倪老师，我后面实验会改进的看看的

把FCS文件传上来，从图上看过补偿了，可能还有别的原因。

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tiger 发表于 2021-7-26 15:21
把FCS文件传上来，从图上看过补偿了，可能还有别的原因。

老师，我上传了这个FSC压缩文件，麻烦您帮我看看有什么问题

tiger

17355475436 发表于 2021-7-31 14:52
老师，我上传了这个FSC压缩文件，麻烦您帮我看看有什么问题

调了一下门和补偿

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老师，这样是不是就可以看第四象限的比例，真是跪谢老师，感动的要哭了。

tiger

17355475436 发表于 2021-8-2 13:51
老师，这样是不是就可以看第四象限的比例，真是跪谢老师，感动的要哭了。 ...

是的，你客气了。