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[其它] 小鼠外周血体积法和微球法做绝对计数

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 楼主| 发表于 2021-7-27 09:58:39 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
想请教各位老师,我第一次做绝对计数,不知道哪种方法好想做下比较,但是遇到了以下问题,请大家帮忙分析下可能的原因。
如图所示,我用小鼠外周血做绝对计数,体积法和微球法用的是同一个血样,抗体、裂解液也是一样的,抗体信息如下:CD45 BV711、CD3 PE-Cy7、CD19 PE。
问题:体积法中CD3和CD19均出现了三群峰,补偿已调节,同一个样在微球法中就只有两群分峰,这是为什么呢?这种情况该如何画门看绝对计数呢?

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发表于 2021-7-27 11:18:20 | 显示全部楼层
体积法,是不是未经洗涤?
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发表于 2021-7-27 11:22:55 | 显示全部楼层
这两种方法计数结果可能有差异,但是不应该出现你说的一个有2个峰一个有三个峰。你可以先用体积法测,完后同一个样本加入微球再测。看一下出来的图形.
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发表于 2021-7-27 12:18:54 | 显示全部楼层
本帖最后由 tiger 于 2021-7-27 12:22 编辑
niwanmao 发表于 2021-7-27 11:18
体积法,是不是未经洗涤?

这两种方法都不能洗,结果很怪异。并且体积法CD3+CD19超出了100%

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 楼主| 发表于 2021-7-28 08:59:52 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-7-27 11:18
体积法,是不是未经洗涤?

两种方法都没有洗涤,不过体积法在裂解15分钟后我有加1mlPBS终止裂解然后上机,微球法没有加PBS,不知道这个步骤是否有影响
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 楼主| 发表于 2021-7-28 09:00:26 | 显示全部楼层
tiger 发表于 2021-7-27 12:18
这两种方法都不能洗,结果很怪异。并且体积法CD3+CD19超出了100%

是的,两种方法我都没有洗涤,也是没有见过这种结果,觉得很奇怪
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 楼主| 发表于 2021-7-28 09:03:14 | 显示全部楼层
bslhk 发表于 2021-7-27 11:22
这两种方法计数结果可能有差异,但是不应该出现你说的一个有2个峰一个有三个峰。你可以先用体积法测,完后 ...

好的,我下次再按照您说的来试一试
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