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[淋巴细胞相关] CART流式检测设置是否合理?

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发表于 2021-7-29 13:43:41 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
求问各位大神,我这边现在做CD19靶点的CART研发,之前流式检测是QC在做,现在我们自己捣鼓,完全懵的,不知这样设置检测是否合理?还有3个问题,1.day0加入transact激活后,day1测cd3表型突然会下降?请问这是什么原因2.收获day13,我的中央记忆细胞,一直没有向效应记忆细胞转移,这又是为何呢?
3.而且基本没有TEF,效应t细胞,这又是什么原因呢?

SampleCD3+(%)
CD8+/CD3+(%)
CD4+/CD3+(%)
CD25+/CD3(%)
CD279+(%)
Tem(%)
Tcm(%)
Tef(%)
Tn(%)
CAR+(%)
CD19+/CD45+(%)
Day0  thawed aphresis76.7028.0565.6094.6032.5418.5926.863.9950.57  
Day0  PBMC56.4725.4471.1815.6732.238.5622.975.6162.86  
day1  before transduction-120.9122.6672.3682.2028.8810.3714.2913.4361.90  
day1  before transduction-226.2925.6870.3784.8028.9410.5817.389.5462.5  
day254.9731.4667.7977.6454.4435.9418.3419.0626.65  
day371.7628.1168.2286.7471.063.9252.533.0540.50  
day474.634.568.2998.4582.192.2593.780.183.79  
day598.0741.5659.6695.8142.110.4096.230.083.29  
day698.4139.7259.0476.6027.900.3797.110.042.48  
day1098.3141.8858.4954.4757.2912.9980.882.303.84  
day1397.8441.4455.1557.5320.682.7191.120.285.7946.400.11
T  phenotype Panel
CD3
FITC
CD4
APC
CD8a
BV510
CD45RO
APC-cy7
CD62L
BV650
CD279
PE/Dazzle594
CD25
PE

组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2021-7-29 14:09:55 | 显示全部楼层
1、你这里的transact是指什么东西?
2、CD3的表达率降低,是真正的降低?还是因为仅仅荧光强度降低,导致你们十字门设置错误?
3、由于不知道你们的对照设置和门设置是否合理,所以无法评判没有向效应记忆或效应T转换的真实性。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2021-7-29 16:13:48 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-7-29 14:09
1、你这里的transact是指什么东西?
2、CD3的表达率降低,是真正的降低?还是因为仅仅荧光强度降低,导致你 ...

倪老师好,这个transact是美天旎的T细胞激活剂,含有CD3和CD28抗体。我不知怎么把流式结果图弄出来,好想让您帮我分析下,是否流式分析有问题。而且day0的血样流式CD25很高,不知什么原因。但是分离了pbmc测流式,cd25又正常了。
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2021-7-29 19:17:03 | 显示全部楼层
juju0416 发表于 2021-7-29 16:13
倪老师好,这个transact是美天旎的T细胞激活剂,含有CD3和CD28抗体。我不知怎么把流式结果图弄出来,好想 ...

CD3的检测,你那边有没有试过多洗涤几次后,再与CD3孵育检测?
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2021-7-30 16:11:46 | 显示全部楼层
CD3表位肯定被磁珠上的抗体占了
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发表于 2021-8-2 08:33:10 | 显示全部楼层
我们使用的是抗体激活,CD3前期培养都会有降低趋势,而且分群不明显,。随着培养时间的延长,会慢慢好起来
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
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