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[标本处理] 肿瘤样本处理

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 楼主| 发表于 2021-8-10 18:16:32 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
hi 各位老师好!

肿瘤的处理是否需要增加percoll或者CD45+bead富集这一步骤,近期发现有些转基因小鼠的肿瘤TIL表达不正常,比如CCR2-KO 小鼠,在肿瘤样本的单核和巨噬中依然可以发现CCR2表达强阳,但在同动物的blood中是明显阴性的。补偿也检查过,不像是补偿问题。
那就可能是panel设计问题,或者小鼠CCR2-KO并不完全的原因。但是panel如果有问题,那blood应该也会有问题才对;小鼠的KO问题也很奇怪,blood是符合预期的。
所以请教各位,是否可能是tumor的处理需要增加percoll或CD45+bead富集这一步骤,减少样本的非特异性?有这种经验的欢迎分享。





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发表于 2021-10-1 08:12:46 | 显示全部楼层
今天往回翻看才看到这个问题。

能否将图片和方案传上来,才能帮你分析,需要避免肿瘤组织的死细胞造成的非特异性荧光。
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发表于 2021-10-12 17:33:15 | 显示全部楼层
我也想问下,之前把肿瘤组织研磨获得单细胞染色后上机发现免疫细胞几乎没有,后来想着是不是应该先CD45富集一下再检测
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发表于 2021-10-12 18:11:08 | 显示全部楼层
pc627901478 发表于 2021-10-12 17:33
我也想问下,之前把肿瘤组织研磨获得单细胞染色后上机发现免疫细胞几乎没有,后来想着是不是应该先CD45富 ...

首先要保证肿瘤细胞解离成单细胞的效率和细胞活力,这两个因素都必须要保证。一般这两个因素保证了,免疫细胞不会没有的。
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 楼主| 发表于 2021-10-13 15:06:28 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-10-1 08:12
今天往回翻看才看到这个问题。

能否将图片和方案传上来,才能帮你分析,需要避免肿瘤组织的死细胞造成的非 ...

panel如下:
panel.jpg

肿瘤FMO NO CCR2:

T FMO NO CCR2

T FMO NO CCR2

Naive 野生型小鼠的肿瘤:

WT T-1

WT T-1

WT T-2

WT T-2

MouCCR2-KO 小鼠的肿瘤:

CCR2 KO T-1

CCR2 KO T-1

CCR2 KO T-2

CCR2 KO T-2

外周血FMO NO CCR2:

PB FMO NO CCR2

PB FMO NO CCR2


Naive 野生型小鼠的外周血:

WT PB-1

WT PB-1

WT PB-2

WT PB-2

MouCCR2-KO 小鼠的外周血:

CCR2 KO PB-1

CCR2 KO PB-1

CCR2 KO PB-2

CCR2 KO PB-2


野生型小鼠中外周血的CCR2表达明显,KO小鼠中外周血检测不到CCR2。
但在肿瘤中CCR2的表达,KO小鼠的比野生型小鼠表达明显降低,但是还是明显有阳性表达的。
FMO都是正常的。

请教老师是不是肿瘤样本处理问题,引入了非特异性?

Bangslabs、Spherotech流式微球,帮您做好仪器设置、QC、荧光定量、细胞周期
发表于 2021-10-13 21:50:07 | 显示全部楼层

这个结果我觉得挺好啊,你是指这1%左右的阳性吗?我觉得像背景。
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 楼主| 发表于 2021-10-14 08:19:05 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-10-13 21:50
这个结果我觉得挺好啊,你是指这1%左右的阳性吗?我觉得像背景。

MouCCR2-KO 小鼠的血液没问题的,主要是肿瘤,M-MDSC还有17%的阳性,Mac还有32%的阳性。
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发表于 2021-10-14 10:54:14 | 显示全部楼层
毛豆24821 发表于 2021-10-14 08:19
MouCCR2-KO 小鼠的血液没问题的,主要是肿瘤,M-MDSC还有17%的阳性,Mac还有32%的阳性。 ...

你们的模型里面,是能把全系列细胞的CCR2都能KO了?
你知道活性/增殖/凋亡/焦亡/自噬的区别吗?——点击了解细胞健康检测全面方案
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