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[淋巴细胞相关] 小鼠肿瘤组织浸润淋巴细胞检测问题

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 楼主| 发表于 2021-9-3 15:46:40 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
本人流式小白,最近需要检测小鼠成瘤组织浸润淋巴种类及水平。一开始纠结于如何消化肿瘤组织获取单细胞。在浏览各位前辈的帖子中,终于将这个问题克服了,但是又碰到新的问题。最近我打算检测肿瘤中CD8+T细胞水平。获取肿瘤组织单细胞后,分别用PERCP-7AAD,FITC-CD3和APC-CD8a对细胞进行染色,常温染色25分钟,用1%BSA的PBS洗两遍,上机检测。我们的机器是BD FACS calibur。7-AAD阴性细胞约有90%,效果还可以。但是,继续挑选CD3+细胞时就遇到了麻烦,细胞分群不明显。我的圈门过程如图片所示,FCS文件也上传了。恳请各位前辈帮我分析下,FSC和SSC中选取的细胞范围是否合理,CD3的界面中如何画门,我做的淋巴细胞比例是否合理,感谢大家。


                               
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FCS文件1.rar

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FCS文件2.rar

4.6 MB, 下载次数: 2

流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2021-9-3 15:51:23 | 显示全部楼层
图片不见了,补发一下,谢谢各位老师
未标题-1.jpg
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2021-10-27 09:39:02 | 显示全部楼层
右下角的应该是你想要的T细胞。建议加CD45。在圈CD3+细胞群之前,先圈CD45+

Image_20211027093527.png
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2021-10-29 15:45:08 | 显示全部楼层
18810989038 发表于 2021-10-27 09:39
右下角的应该是你想要的T细胞。建议加CD45。在圈CD3+细胞群之前,先圈CD45+

...

好的,感谢老师的帮助
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 7 天前 | 显示全部楼层
您好,我想咨询一下,在染完抗体之后为什么要用含1%BSA的PBS清洗呢?是为了封闭吗?
你知道活性/增殖/凋亡/焦亡/自噬的区别吗?——点击了解细胞健康检测全面方案
发表于 7 天前 | 显示全部楼层
萧刻 发表于 2021-11-22 12:14
您好,我想咨询一下,在染完抗体之后为什么要用含1%BSA的PBS清洗呢?是为了封闭吗? ...

为了保护细胞。
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