流式实验里细胞分群不好是为什么？

ziniu9572

之前那个问题没有描述好，重新请教倪老师。流式细胞仪实验里，FSC/SSC图上细胞很分散，没有明显的分群。尝试调大或调小FSC/SSC电压都没法让细胞比较好的分群。可能是什么原因造成的？

样品提取自成年小鼠的脑组织，目的是分选其中的星形胶质细胞。上样之前做了台盼蓝染色，细胞的存活率在45%左右。

第一次实验的时候能看到整体细胞分布有分群的，这一次就不行了。翻看了试验记录，发现两次最大的不同就是稀释了消化组织的中性蛋白酶的浓度（6U/ml下降到2.4U/ml）

这是第一次实验得到的FSA/SSC图，可以看到靠下的地方有一个细胞分群

圈中那一群细胞可以看到，标记的APC荧光也有明显的信号

这是第二次实验的FSA/SSC图,看不到分群

同样画门的位置，没有APC信号

niwanmao

45％的活力其实说明样本处理质量不太好了，所以从FSC/SSC分群来看，确实不好，绝大多数都是碎片了。

至于第一次有分群，第二次没有，需要明确的是，第一次的阳性群，是否真阳性？还是非特异性的假阳性？需圈中阳性群，反过去看它们在FSC/SSC的位置。第二次，是否操作上存在问题？是否能多重复几次？

五味瓶JJJ

我觉得你应该优化处理脑组织的方法