腹腔巨噬细胞 M1/M2转化实验流程和文章

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求腹腔巨噬细胞 M1/M2转化实验流程和文章

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参考Dale MA, Xiong W, Carson JS, et al. Elastin-Derived Peptides Promote Abdominal Aortic Aneurysm Formation by Modulating M1/M2 Macrophage Polarization. J Immunol. 2016;196(11):4536-4543. doi:10.4049/jimmunol.1502454一文，虽然该文章写的是骨髓中巨噬细胞分离和极化，但是对腹腔分离和极化巨噬细胞也是可以借鉴的：
通过颈椎脱臼对小鼠实施安乐死。从肌肉组织中分离出股骨和胫骨，并在 70% 乙醇中消毒 15 秒，然后在 PBS (1x) 中洗涤。去除每个股骨和胫骨的末端，并以 25 号针头用DMEM培养基（含1% 胎牛血清）冲洗骨髓，然后将骨髓细胞通过细胞过滤器过滤，再离心，再用 1x PBS 洗涤一次，最后以每 10 ml BMDM培养基加入1x10E7个细胞接种在培养皿中（BMDM培养基的配方为DMEM培养基中加入10% FBS、20% L929细胞条件培养基（M-CSF 来源）、1% 青霉素/链霉素和 1% 谷氨酰胺）。 巨噬细胞在 37°C 下生长 7 天，每两天取出培养基并更换为新鲜的BMDM培养基。一周后巨噬细胞的纯度可达到98.6%。

此时，巨噬细胞达到了足够的纯度，就可以用以下方法将其诱导为M1或M2：
- IFN-γ（20 ng/ml）和 LPS（100 ng/ml）诱导为M1
- IL-4 (20 ng/ml)诱导为M2