Th17流式问题

Amelia1123 · 发表于 2022-1-8 00:05:17

本帖最后由 Amelia1123 于 2022-1-8 13:45 编辑

流式新手，小鼠做Th17，分别用了CD45、CD3、CD4、IL-17A这几个抗体，都是biolegend的，固定破膜剂是biolegend的，不是分开的，是一瓶试剂，刺激的试剂也是该品牌，是PMA，离子霉素还有蛋白转运抑制剂的混合液，刺激6个小时，做了脾脏和结肠两种组织，但是分析之后，CD4+下的IL-17A阳性，特别特别少，上机的时候，在不圈定CD4的情况下，结肠组织中IL-17A阳性细胞还能有一些，有的能有4%，但是脾脏看不出来，也不太明白是没有染上还是什么原因？还有就是没有做Percoll，不确定是不是这个原因？请大家指点一二

niwanmao · 发表于 2022-1-8 09:27:01

红细胞不去掉的话，可能效果是会差一点的。不过最好能够多重复几次，一般商品化的东西，大多性能还是做过验证的。
破膜染色也蛮关键，如果结肠组织的阳性信号可靠的话，应该破膜问题不大。

Amelia1123 · 发表于 2022-1-8 13:49:26

niwanmao 发表于 2022-1-8 09:27
红细胞不去掉的话，可能效果是会差一点的。不过最好能够多重复几次，一般商品化的东西，大多性能还是做过验 ...

谢谢老师，脾脏组织做了裂红处理，肠道没有，我发现昨天结果图没有上传成功，您可能没有看到，这次我做了附件上传，如果可以的话，您再看看

niwanmao · 发表于 2022-1-8 17:13:18

Amelia1123 发表于 2022-1-8 13:49
谢谢老师，脾脏组织做了裂红处理，肠道没有，我发现昨天结果图没有上传成功，您可能没有看到，这次我做了 ...

从图形上看，似乎两组都没染出来嘛。

抗体和破膜，这两个因素逐一排查看看吧。

Amelia1123 · 发表于 2022-1-8 19:41:14

niwanmao 发表于 2022-1-8 17:13
从图形上看，似乎两组都没染出来嘛。

抗体和破膜，这两个因素逐一排查看看吧。 ...

好的，明白了，我再试试，谢谢老师

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