请问这个图是什么参数没有调好

accord220cs · 发表于 2011-7-1 13:08:09

这是检测细胞凋亡的图，annexin-V单染的。我觉得FSC和SSC的都没调好，上机时凋了很久，还是这个奇怪的细胞团。请问是细胞没处理好还是我没调好参数。谢谢

niwanmao · 发表于 2011-7-1 13:33:42

accord220cs 发表于 2011-7-1 13:08

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这是检测细胞凋亡的图，annexin-V单染的。我觉得FSC和SSC的都没调好，上机时凋了很久，还是这个奇怪的细胞 ...

图怎么这么小？
从FSC－SSC图上看，这些细胞就不对，似乎都是碎片。

accord220cs · 发表于 2011-7-1 13:41:39

第一次发图，应该是没调好大小，不好意思。那是细胞没处理好吗？因为是别人准备的细胞，那我再问问是怎样处理的吧。谢谢倪老师

niwanmao · 发表于 2011-7-1 13:44:24

accord220cs 发表于 2011-7-1 13:41

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第一次发图，应该是没调好大小，不好意思。那是细胞没处理好吗？因为是别人准备的细胞，那我再问问是怎样处 ...

首先你问他，是不是贴壁细胞，如果是贴壁细胞，建议他还是不要做AV了。
如果是悬浮细胞，建议他染色前先在显微镜下面观察一下细胞形态好不好，如果不好，就不要做，省的浪费试剂。

如果是细胞状态好，而做成这样，肯定就是处理过程中试剂或操作力度的问题。

accord220cs · 发表于 2011-7-1 15:41:15

刚刚问了，一是细胞为贴壁细胞，胰酶中含有EDTA,二是确实细胞有些长过了。另外，PI染了15分钟，又等了2个小时才上的机，这样时间肯定过了。

niwanmao · 发表于 2011-7-1 16:16:57

accord220cs 发表于 2011-7-1 15:41

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刚刚问了，一是细胞为贴壁细胞，胰酶中含有EDTA,二是确实细胞有些长过了。另外，PI染了15分钟，又等了2个小 ...

贴壁细胞建议他不要做AV-PI，很难做，建议他直接做细胞周期，检测亚G1峰。

accord220cs · 发表于 2011-7-1 16:29:16

好的，谢谢老师

chujindong · 发表于 2011-7-2 08:23:10

niwanmao 发表于 2011-7-1 13:33

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图怎么这么小？
从FSC－SSC图上看，这些细胞就不对，似乎都是碎片。

是这样啊。我有一次帮别人做间充质干细胞的时候FSC-SSC散点图就是那样的，没有特别明显的细胞群。FSC调到10，也没有看见分群。他说他的细胞状态是很好的，因为我做的不多，所以不大肯定是不是他操作的问题。放了一晚上让其他人做，也只圈到了很小的一团细胞，FSC调到0，细胞还在最右边，而且明显还有部分在坐标外。
因为是别人的图，没有拿到，不能贴上来了。

niwanmao · 发表于 2011-7-2 10:26:20

chujindong 发表于 2011-7-2 08:23

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是这样啊。我有一次帮别人做间充质干细胞的时候FSC-SSC散点图就是那样的，没有特别明显的细胞群。FSC调到 ...

看是不是碎片，FSC-SSC不是绝对的依据，还需要看荧光是不是在对角线附近。

如果FSC调到0信号还在最右边，那么那些信号肯定就有问题，不会是真正的细胞，应该放弃。

kitemay · 发表于 2011-7-5 09:27:43

FSC和SSC位置跟放大倍数也有关系

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[凋亡检测] 请问这个图是什么参数没有调好