小鼠脑组织分离的样品，总是有一个体积很大的细胞群

ziniu9572 · 发表于 2022-3-9 10:28:37

本帖最后由 ziniu9572 于 2022-3-9 10:31 编辑

如图，做出来的样品主要有两群细胞

APC，FITC都是阳性

绝大部分细胞都在P1那个细胞群里

ziniu9572 · 发表于 2022-3-9 10:29:31

这个群里的细胞不论是FITC还是APC都是阳性，非常影响我实验的结果

ziniu9572 · 发表于 2022-3-9 10:32:54

我做了阴性对照，没有敷任何抗体的情况下APC，FITC还是有信号

ziniu9572 · 发表于 2022-3-9 10:35:38

会不会是我制样的问题，没有裂解红细胞，我是用2.4U/ML浓度的 Dispase II消化30min，难道是没消化好？

ziniu9572 · 发表于 2022-3-9 10:49:45

难道是死细胞或者是粘连的细胞？

niwanmao · 发表于 2022-3-9 12:09:37

未染任何抗体的情况下，出现这两个通道这么强的荧光，两种可能性：
1、死细胞
2、实体组织细胞（由于体积大或颗粒原因，非特异性非常强）。

ziniu9572 · 发表于 2022-3-9 13:03:14

niwanmao 发表于 2022-3-9 12:09
未染任何抗体的情况下，出现这两个通道这么强的荧光，两种可能性：
1、死细胞
2、实体组织细胞（由于体积大 ...

谢谢老师！我再去摸一下条件看看

ziniu9572 · 发表于 2022-3-9 13:21:27

niwanmao 发表于 2022-3-9 12:09
未染任何抗体的情况下，出现这两个通道这么强的荧光，两种可能性：
1、死细胞
2、实体组织细胞（由于体积大 ...

关于第二个情况，有没有可能是我用来剪碎组织的剪刀太大了（普通的小剪刀，不是眼科用的那种剪刀）

niwanmao · 发表于 2022-3-9 18:04:46

ziniu9572 发表于 2022-3-9 13:21
关于第二个情况，有没有可能是我用来剪碎组织的剪刀太大了（普通的小剪刀，不是眼科用的那种剪刀） ...

主要是其它标记都没有，无从判断，也可能是巨噬细胞，巨噬细胞的非特异性荧光很强。
至少这两群都是成功的，只是在获取的时候，你得把阈值提高，把那些无用的碎片信号去除了，尽量收集那些有效的信号。

ziniu9572 · 发表于 2022-3-10 09:38:33

niwanmao 发表于 2022-3-9 18:04
主要是其它标记都没有，无从判断，也可能是巨噬细胞，巨噬细胞的非特异性荧光很强。
至少这两群都是成功 ...

对我非常有帮助，再次感谢老师！

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