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[淋巴细胞相关] T细胞检测CD3、CD4、CD8、CAR

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 楼主| 发表于 2022-3-16 16:53:57 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
问题描述:我们在对control T细胞进行CD3、CD4、CD8、CAR检测时遇到假阳性问题。数据如下图所示:我们用protein L对control T进行标记,理论上并不会有表达,但出现了假阳性,为分析原因,设置了几种对照:同一样本分为以下几组:
1.标记CD3、CD4、CD8、protein L
2.标记CD3、CD4、protein L
3.标记CD3、CD8、protein L
4.标记CD3、protein L
5.标记protein L完成后清洗,再进行CD3、CD4、CD8的标记。
结果:除了标记CD3、CD4、CD8、protein L 的这一组有阳性,其他组均为阴性,有人遇到过类似的情况吗?请大家帮忙分析一下原因,谢谢!

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发表于 2022-3-16 18:14:40 | 显示全部楼层
1也是标记完之后,洗涤过,再上机?
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 楼主| 发表于 2022-3-18 09:08:58 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-3-16 18:14
1也是标记完之后,洗涤过,再上机?

1是将Protein L、CD3、CD4、CD8全部一起标记,4℃孵育30min后洗涤,然后重悬上机的。
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发表于 2022-3-18 09:20:36 | 显示全部楼层
汀雅 发表于 2022-3-18 09:08
1是将Protein L、CD3、CD4、CD8全部一起标记,4℃孵育30min后洗涤,然后重悬上机的。 ...

洗涤过,不应该会有如此明显的非特异性才对。不知道重复过几次?
或者是否将各通道两两组合的散点图全部放出来找找原因看。
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发表于 2022-3-18 09:33:13 | 显示全部楼层
没遇到过你的问题。不过想问的你这是day几的数据,4/8还能保持一比一的数据。
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 楼主| 发表于 2022-3-23 09:33:53 | 显示全部楼层
本帖最后由 汀雅 于 2022-3-23 09:35 编辑
niwanmao 发表于 2022-3-18 09:20
洗涤过,不应该会有如此明显的非特异性才对。不知道重复过几次?
或者是否将各通道两两组合的散点图全部放 ...

1.洗涤是1次
2.我给Protein L阳性部分一个颜色去看CD4、CD8,发现Protein L阳性大部分为CD4阳性细胞,可是我的第二个组“标记CD3、CD4、protein L”中的Protein L确是阴性的,实在搞不懂了
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发表于 2022-3-23 11:15:32 | 显示全部楼层
汀雅 发表于 2022-3-23 09:33
1.洗涤是1次
2.我给Protein L阳性部分一个颜色去看CD4、CD8,发现Protein L阳性大部分为CD4阳性细胞,可是 ...

不同参数的散点图,分别放出来看一下,这样看来或许是补偿问题了。
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 楼主| 发表于 2022-3-23 17:35:15 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-3-23 11:15
不同参数的散点图,分别放出来看一下,这样看来或许是补偿问题了。

我感觉不像是补偿的问题
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组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2022-3-23 18:07:57 | 显示全部楼层
汀雅 发表于 2022-3-23 17:35
我感觉不像是补偿的问题

这样的话,建议重复多次,看看现象是否有可重复性还是偶发现象。
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 楼主| 发表于 2022-3-24 09:03:10 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-3-23 18:07
这样的话,建议重复多次,看看现象是否有可重复性还是偶发现象。

好的,谢谢老师!
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