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[结构和原理] 关于脾脏中T细胞CD44 CD62L分群的疑问

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 楼主| 发表于 2022-3-24 14:48:35 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
本帖最后由 wangyufei517 于 2022-3-24 15:22 编辑

各位老师好,我做小鼠脾脏T细胞CD44 CD62L分群的时候总是会出现双阴性的细胞群(第一张图是CD4和CD8分群,第二、三张图是CD44 CD62分群)。我导说这是死细胞,说我技术不过关。我每一步都尽量做得很好了,但还是出现大量双阴性的。希望老师们能解答一下。
难道是裂红时间久了?我是2mL ACK混匀后裂解1分半,用PBS中止,离心。

CD4-APC/CD8-APC-Cy7

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CD44-FITC/CD62L-PE

CD44-FITC/CD62L-PE
图5.png
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发表于 2022-3-24 14:54:55 | 显示全部楼层
你指的是CD4和CD8上面的双阴性群体吗?
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 楼主| 发表于 2022-3-24 15:13:43 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-3-24 14:54
你指的是CD4和CD8上面的双阴性群体吗?

是图4和5 CD44 CD62L的左下的那群细胞
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发表于 2022-3-24 16:02:51 | 显示全部楼层
wangyufei517 发表于 2022-3-24 15:13
是图4和5 CD44 CD62L的左下的那群细胞

这种双阴性的细胞,有文献报道跟肿瘤、衰老都有关。从你前一个门看,应该是圈准了,所以是否跟小鼠本身有关。
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 楼主| 发表于 2022-3-25 10:00:48 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-3-24 16:02
这种双阴性的细胞,有文献报道跟肿瘤、衰老都有关。从你前一个门看,应该是圈准了,所以是否跟小鼠本身有 ...

我这个样本确实是荷瘤小鼠的脾脏做的,我再查查相关文献,感谢!
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发表于 2022-4-15 11:17:24 | 显示全部楼层
一方面原因正如倪老师所说与肿瘤衰老有关,另一方面从技术上来讲这群DN细胞是由CD62L单阳细胞降解而来,因为CD62L对温度敏感,所以小鼠脾脏取出后用冷的2% RPMI泡着放在冰上,之后进行冰上研磨,至于脾脏裂红,我们做过小鼠脾脏裂红与不裂的对比 没有太大差异
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发表于 2022-4-16 16:26:17 | 显示全部楼层
wangyufei517 发表于 2022-3-25 10:00
我这个样本确实是荷瘤小鼠的脾脏做的,我再查查相关文献,感谢!

这种小鼠CD44lowCD62L-T细胞属于terminally difffferentiated effffector T cells (TEMRA),在肿瘤模型中比例升高也是正常的吧
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 楼主| 发表于 2022-5-11 10:56:23 | 显示全部楼层
Climber 发表于 2022-4-15 11:17
一方面原因正如倪老师所说与肿瘤衰老有关,另一方面从技术上来讲这群DN细胞是由CD62L单阳细胞降解而来,因 ...

好的!我下回在冰上研磨试试,这回是研磨完一直放在孔板里,等所有的脾都研磨后统一转到离心管离心的,有可能是您说的问题
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 楼主| 发表于 2022-5-11 10:57:53 | 显示全部楼层
ccx793244586 发表于 2022-4-16 16:26
这种小鼠CD44lowCD62L-T细胞属于terminally difffferentiated effffector T cells (TEMRA),在肿瘤模型 ...

我最近一直没有做过正常模型的小鼠脾脏,全是肿瘤的,所以不知道是不是只在肿瘤中出现了这种情况,下次做个正常的小鼠作对照看看
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发表于 2022-5-13 18:31:01 | 显示全部楼层
这个就属于批间差异我觉得,因为我也是经常做出来左下角有一团细胞,有时候又没有,还都是正常小鼠,可能跟操作细节有关,理想情况应该是左下角很少或没有
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