线粒体电位-流式，加完工作液后出现絮状。cccp阳性组必要性

sermon

用的abbkine家JC-1试剂盒。加完工作液孵育后的状态，后面吹打就散开了，但是离心后还是有絮状物。请问这是JC-1没有溶解吗还是什么原因啊，应该怎么做更好。还想请问下CCCP组的意义，哪种情况下设置cccp组啊！感谢回答！

niwanmao

镜下看过细胞没？或者过滤后上机获取过没？

如果都没细胞了，可能细胞被破坏了。

ZDlk

你好，我之前做JC-1试剂盒的时候也出现过类似现象，不过用的试剂盒不是你发的这个厂家，而且我的絮状物用移液器都吹不散，后面查明原因，可能是在配置JC-1工作液时，先用超纯水去溶解JC-1（JC-1需要提前拿出来彻底解冻）这一步没有混匀，需要混匀之后再加入buffer。这样处理细胞后就没有问题，后续我重做了一遍，结果就挺好。

sermon

niwanmao 发表于 2022-3-26 10:20
镜下看过细胞没？或者过滤后上机获取过没？

如果都没细胞了，可能细胞被破坏了。 ...

镜下细胞还在，没有过滤，我当时把离心机温度往上调，直接上机了，效果不好。一般这种情况可以用什么过滤啊？可以麻烦您再发下JC-1流式数据处理链接吗？之前的链接不能用了 。

sermon

ZDlk 发表于 2022-3-28 13:55
你好，我之前做JC-1试剂盒的时候也出现过类似现象，不过用的试剂盒不是你发的这个厂家，而且我的絮状物用移 ...

嗯嗯好嘞，谢谢你，我今天打算超声波碎一下，然后混匀。再试一次。请问您之前设置CCCP组了吗？这个组是什么意义啊

ZDlk

sermon 发表于 2022-3-29 12:32
嗯嗯好嘞，谢谢你，我今天打算超声波碎一下，然后混匀。再试一次。请问您之前设置CCCP组了吗？这个组是什 ...

我其实没有懂为啥要用超声破碎，我第一次做的时候，絮状物吹不开，然后我就离心，只取了上清上机（当时考虑流式细胞仪只能上单细胞悬液，絮状物怕会堵住管道，所以离心后只取了上清），结果上机的细胞全是破碎的，没有正常细胞也没有凋亡细胞，按道理来说，你的实验方法应该是跟说明书的方法保持一致的，不需要额外加其他的步骤。
设置cccp组的是必须的，这个组是阳性对照，用cccp处理就是为了得到凋亡细胞，但是处理时cccp的浓度和处理时间需要根据说明书的条件摸索一下，我之前按照说明书的浓度与时间处理正常细胞，但凋亡比例相对不是特别高，就可能需要加长处理时间。

sermon

ZDlk 发表于 2022-3-30 08:46
我其实没有懂为啥要用超声破碎，我第一次做的时候，絮状物吹不开，然后我就离心，只取了上清上机（当时考 ...

同样操作下，我做了组A类细胞，它没有絮状物。我的B类细胞还是有，可能是B细胞培养基物质干扰了，后来重悬上机了。因为我的实验组是用药物促进凋亡的，所以感觉cccp组没有太大必要性。不知道想的对不对

ZDlk

sermon 发表于 2022-3-31 15:05
同样操作下，我做了组A类细胞，它没有絮状物。我的B类细胞还是有，可能是B细胞培养基物质干扰了，后来重 ...

如果你的A组和B组细胞都有凋亡的话，那证明你的实验过程应该是没问题的，但有时在做摸索凋亡条件时，不做cccp组，而且凋亡不成功导致上机结果未出现凋亡，这时如果没有阳性对照，可能就不清楚是样本原因还是操作过程或者试剂的原因了。

sermon

ZDlk 发表于 2022-3-31 15:55
如果你的A组和B组细胞都有凋亡的话，那证明你的实验过程应该是没问题的，但有时在做摸索凋亡条件时，不做 ...

明白了明白了，谢谢你谢谢你。请问您有JC1流式分析的链接吗，方便发一下学习吗，感谢。